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      *325=175500 pg=175.5 ng,因此需要的目的片段大概为2.9 ul-8.8 ul。而该反应体系中允许的目的片段最大量为4 ul,我按照最大量加入的。混匀后加入Solution I,16度连接了大概一个小时。然后转化Top 10感受态,冰上20 min, 42度90s,冰上2 min。然后加入900 ul LB 37度培养1小时,取200 ul涂板。第二天过来大概长了20个克隆,我了12个,摇了大概3个小时,做了菌液PCR,最后阳性的克隆只有两个。 我把这两个克隆小摇

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