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冰冻
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Cefoxitin Dimer C
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100
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上海汇谱仪器有限公司
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文献和实验Science 背靠背!施一公、黄志伟团队同日揭开 B 细胞受体复合物的神秘面纱
。 图片来源:Science 图片来源:Science 黄志伟团队解析了人 IgG 和 IgM 两种同种型的 B 细胞受体的蛋白复合物结构。 复合物中包含了一个膜结合形式的免疫球蛋白(mIg)同源二聚体,这部分的主要功能是识别抗原;同时一个膜结合形式的 Igα/β(CD79α/CD79β)异二聚体,这部分的主要功能是信号传递。其中,mIg 二聚体包含了两段结构区域,分别是 Fab 和 Fc 结构域。 sIgM 在一般情况下会以五聚体的形式发挥最终功能,但是当膜结合的静息态 B 细胞
的。引物设计的要求: (1)避免重复碱基,尤其是 G。 (2)Tm=58-60 度。 (3)GC=30-80%。 (4)3' 端最后 5 个碱基内不能有多于 2 个的 G 或 C. (5)正向引物与探针离得越近越好,但不能重叠。 (6)PCR 扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在 80-250bp 之间都可;80-150bp 最为合适(可以延长至 300 bp)。 (7)引物的退火温度要高,一般要在 60 度以上;要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。
?1)重新设计引物,这是解决该问题最根本的办法2)增加模板用量3)减小引物浓度4)引物长度适中5)提高退火温度6)减少循环次数7)可以适当的在 Mix 中添加少量的甘油或 DMSO最后,希望大家在读了该篇文章后,引物二聚体可以永远离你而去!最后的最后,给大家补充一个好的点子:基本上消灭二聚体,最核心的注意是3'尾巴的三个碱基最好不要全部是 G 或 C 组成的3'尾巴的三个碱基的互补序列不要出现在两条引物序列里
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