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- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰冻
- 英文名：
Cefoxitin Imprurity C8
- 库存：
100
- 供应商：
上海汇谱仪器有限公司
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文献和实验设计应遵循以下两点： 在C-端加入标签 使用长标签或者引入一段linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8—10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 分子筛 vS 离子交换 亲和层析之后，往往使用分子筛做最后的精纯，但如果杂质依然很多或者膜蛋白
、中和、干燥活化，使其表面保持自由硅醇基，如酯化键合，又如聚合键合固定相：R为十八烷基（-C18），辛烷基（-C8），苯基（C6）或C2等，采用极性强的溶剂做流动相，如水、甲醇、乙腈等。R也可以是CN、苯基等基团，采用极性弱的溶剂为流动相。 正相色谱与反相色谱的区别可用下表来说明： 固定相的分离选择性决定于可被保留组分的保留强度；所以固定相的选择将取决于分析物质和样品溶剂的性质。 分析物的极性与固定相极性非常相似时，可得到分析物的最佳保留，两者极性越相似保留越好，所以要尽量选择极性
交换 亲和层析之后，往往使用分子筛做最后的精纯，但如果杂质依然很多或者膜蛋白本身不带标签，则需要使用离子交换层析。 离子交换层析 离子交换层析推荐使用 RESOURCE 和 Capto HiRes 系列，能得到比较好的分辨率。不过要注意阴离子交换实验中不要添加阴离子型去垢剂，阳离子交换实验中则不能加入阳离子型去垢剂，以免影响层析柱载量。 离子交换之前需降低缓冲液中盐浓度，由于膜蛋白的特殊性，推荐使用脱盐柱进行此步骤，根据样品体积可选择 HiTrap Desalting
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