- ￥205 - 2650
- 碧云天（beyotime）
- D7057
- 2025年09月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
100μg/500μg/2mg
| 规格： | 100μg | 产品价格： | ￥205.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500μg | 产品价格： | ￥827.0 |
| 规格： | 2mg | 产品价格： | ￥2650.0 |
碧云天生产的T4 Gene 32 Protein (ssDNA结合蛋白)，也称T4 gp32 protein，T4 gp32蛋白或T4噬菌体gp32蛋白，是一种由噬菌体T4基因组的基因32编码的单链DNA (ssDNA)结合蛋白，常用于基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)的等温扩增反应等。
T4 Gene 32 Protein为T4噬菌体DNA复制和修复所必需。在T4噬菌体DNA复制过程中，T4 gp32结合并稳定暂时形成的单链DNA区域。在使用电子显微镜观察细胞内DNA结构的时候，该蛋白也被广泛用于稳定和标记单链DNA区域。此外，T4 gp32还被报道可以促进限制性内切酶和T4 DNA聚合酶活性，在RT-PCR过程中提高逆转录酶效率，提高PCR产物产量。
T4 gp32 protein可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification, RPA)。RPA主要包括以下几个组分：重组酶(Recombinase) T4 UvsX，重组酶载入因子(Recombinase loading factor) T4 UvsY，Bsu DNA聚合酶大片段以及单链DNA结合蛋白(Single-strand binding protein) (如T4 gp32 Protein)等。在ATP参与的情况下，UvsX与引物相结合形成复合物，扫描DNA模板，寻找到与引物配对的核酸序列。一旦引物被定位到了DNA模板的同源序列，可以直接引发链交换反应形成D-Loop结构：ATP水解产生ADP，UvsX被gp32取代而从DNA模板上解离下来，gp32作为单链结合蛋白可以稳定在被置换的DNA链的D-Loop结构中，防止引物解离。UvsX被解离后，引物3'末端暴露并被Bsu DNA聚合酶识别。随后聚合酶与DNA模板配对并进行引物的延伸和模板的扩增。重组酶载入因子T4 UvsY和拥挤试剂(Crowding reagent) Carbowax20M的加入有利于UvsX与引物的结合，即有利于重组酶UvsX的载入。
碧云天T4 gp32 protein在RPA反应中的作用请参考图1。
图1.碧云天T4 gp32 protein (D7057)在RPA反应中的效果图。以pUC18为模板，使用正向引物Primer-F (5'-AGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCC-3')和反向引物Primer-R (5'-TGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACA-3')进行RPA反应。配制50µl反应体系：包含缓冲液, dNTPs, pUC18, Primer-F, Primer-R, UvsX (D7059), UvsY (D7061), 600ng/μl T4 Gene 32 Protein (D7057), Bsu DNA Polymerase, Large Fragment (D7055)。设置无pUC18的阴性对照，以及无UvsX、无UvsY、无gp32和无Bsu DNA polymerase, Large Fragment的对照。配制好反应体系后，最后统一将Mg(Ac)2加到管壁上，离心以启动反应，39ºC孵育30分钟，随后60ºC加热10分钟。反应结束后离心，从每管取出4μl样品，分别加入0.8µl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析，产物为长度为293bp的片段。结果表明UvsX、gp32、Bsu DNA polymerase, Large Fragment对于RPA反应都是必需的。当体系中不含UvsY时，可以观察到微弱的条带，说明UvsY可以提高RPA反应的效率。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
用途：RPA法等温扩增；稳定或标记ssDNA；在RT-PCR过程中，增加反转录产物的产量；增强体外DNA的合成；与T4 DNA Polymerase和T4 DNA Ligase一起用于位点特异的突变实验；从含有腐植酸的样本如土壤中扩增细菌或真菌基因组时，可提高PCR产物的产量和特异性(当PCR体系中包含T4 gp32蛋白时(2.5μg/100μl)，腐植酸的抑制作用可被降低7倍)；促进限制性内切酶的消化反应。
来源：大肠杆菌表达和纯化而得的T4噬菌体基因32的重组蛋白。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含核糖核酸酶及磷酸酶。
储存液：20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 0.5mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol。
失活或抑制：65ºC孵育10min。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7057S-1 | T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) | 10µl |
| D7057S-2 | 10X T4 Gene 32 Protein Buffer | 500µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7057M-1 | T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) | 50µl |
| D7057M-2 | 10X T4 Gene 32 Protein Buffer | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7057L-1 | T4 Gene 32 Protein (10mg/ml) | 200µl |
| D7057L-2 | 10X T4 Gene 32 Protein Buffer | 8ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20ºC保存。
注意事项：
配制反应体系时，会出现白色沉淀，属于正常现象，不影响实验结果。
该蛋白的最佳反应温度为37ºC。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验单链DNA结合蛋白质 single stranded DNAbinding protein
为DNA蛋白质之一种，是与单链 DNA有强的亲和性，与 DNA复制、遗传的重组等 DNA代谢有关的蛋白质。也称螺旋不稳定蛋白质（ helix destabili－ zing protein），又称解 DNA旋卷蛋白质（ DNAuntwisting protein）。此蛋白质与单链 DNA协同（ cooperative）结合，其结合与 DNA碱基的排列是非特异性的。此蛋白质结合的 DNA使 DNA多聚酶的活性增高，并促进重组过程。单链 DNA结合蛋白质在生物界广泛存在， B．
单链结合蛋白 single strand binding protein
这种蛋白又称为双螺旋稳定蛋白（helix destabilizing protein）。当解旋酶将双链打开以后，单链DNA具有一种潜在的恢复原来双链的能力，重新形成氢键。而且单链本身若有反向重复也会形成发夹结构，这两种情况都会影响复制的，但SSB可以解决这一问题。SSB并不是酶，是由177个aa组成的蛋白，E.coli 的SSB以四聚存在，分子量为74KDa，结合在单链上，每个分子可以覆盖32Nt，使DNA受到保护，不被酶水解，也不回复成双链，因此可以降低DNA的Tm值。SSB
Introduction The recent discovery of RNA interference and in particular the observation that siRNAs can modulate gene expression at the level of transcription, i.e. small-interfering RNA (siRNA) directed transcriptional gene silencing (TGS) in Human
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