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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格:
250μl
AAV-CAG-GFP (AAV9),即AAV9 serotype adeno-associated virus (AAV) expressing GFP,是一种可表达GFP绿色荧光蛋白的腺相关病毒,常用于注射小鼠等动物后作为阴性对照。CAG启动子是一种由巨细胞病毒(CMV)增强子和鸡β-肌动蛋白启动子组合而成的可以用于大多数基因编辑的高效启动子,驱动基因在真核细胞内的高水平表达。CAG启动子保留了CMV增强子,使其具有很强的转录能力,而其中的鸡β-肌动蛋白启动子则使其具有更加广泛和广谱的表达能力。
腺相关病毒是Dependovirus属Parvovirus家族的微小单链DNA病毒,包含100多种血清型。其所介导的基因转移系统可整合至基因组中从而维持外源基因长期稳定表达,广泛用于基因治疗、动物体内目的基因的过表达或敲减等,是一种重要的基因操作工具[1]。AAV感染细胞后通常不会与基因组DNA重组,但可以长期稳定地表达目的蛋白,特别是可以在很多不分裂的细胞中长期稳定表达。AAV还具有滴度高,体内注射不产生明显的免疫反应,对于增殖和非增殖细胞感染效率高等优点。
AAV-CAG-GFP感染后能够在靶细胞中有效表达GFP绿色荧光蛋白,呈现明亮的绿色荧光,可以用作实验对照。
本产品安全性高,由于是复制缺陷型的,感染普通的细胞后不能进行复制和扩增,必须在辅助病毒(如腺病毒和单纯疱疹病毒)存在的情况下才能复制和扩增,从而有效降低了本产品在活体生物中的风险。
腺相关病毒目前发现主要有12种血清型(AAV1-AAV12),不同血清型AAV有不同的衣壳蛋白,其识别结合的细胞膜表面受体也有所不同,因此不同血清型AAV感染不同类型细胞的感染效率也各不相同。不同血清型AAV的组织亲和性参见下表。
| AAV Serotype | Tissue Tropism | |||||||
| Liver | Muscle | Brain | Retina | Lung | Heart | Pancreas | Kidney | |
| AAV1 | √ | Neuron & glia | √ | √ | √ | |||
| AAV2 | √ | √ | √ | |||||
| AAV3 | √ | √ | √ | |||||
| AAV4 | √ | √ | ||||||
| AAV5 | Neuron & glia | √ | alveolar cells | |||||
| AAV6 | √ | √ | √ | |||||
| AAV7 | √ | Neuron | √ | |||||
| AAV8 | √ | √ | Neuron | √ | √ | |||
| AAV9 | √ | √ | Neuron | √ | √ | √ | √ | √ |
本产品为组织亲和性最为广泛的AAV9血清型,能感染多种组织,使用相对比较广泛。
不同血清型AAV的感染不同种类体外培养细胞的效率参见下表(以AAV2感染效率100%为标准)。参考下表,本产品感染培养细胞的效率很低,不太适合用于感染培养的细胞。
| Cell line | AAV1 | AAV2 | AAV3 | AAV4 | AAV5 | AAV6 | AAV8 | AAV9 |
| Huh-7 | 13 | 100 | 2.5 | 0 | 0.1 | 10 | 0.7 | 0 |
| HEK293 | 25 | 100 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 5 | 0.7 | 0.1 |
| Hela | 3 | 100 | 2 | 0.1 | 6.7 | 1 | 0.2 | 0.1 |
| HepG2 | 3 | 100 | 16.7 | 0.3 | 1.7 | 5 | 0.3 | ND |
| Hep1A | 20 | 100 | 0.2 | 1 | 0.1 | 1 | 0.2 | 0 |
| 911 | 17 | 100 | 11 | 0.2 | 0.1 | 17 | 0.1 | ND |
| CHO | 100 | 100 | 14 | 1.4 | 333 | 50 | 10 | 1 |
| COS | 33 | 100 | 33 | 3.3 | 5 | 14 | 2 | 0.5 |
| MeWo | 10 | 100 | 20 | 0.3 | 6.7 | 10 | 1 | 0.2 |
| NIH3T3 | 10 | 100 | 2.9 | 2.9 | 0.3 | 10 | 0.3 | ND |
| A549 | 14 | 100 | 20 | ND | 0.5 | 10 | 0.5 | 0.1 |
| HT1180 | 20 | 100 | 10 | 0.1 | 0.3 | 33 | 0.5 | 0.1 |
| Monocytes | 1111 | 100 | ND | ND | 125 | 1429 | ND | ND |
| Immature DC | 2500 | 100 | ND | ND | 222 | 2857 | ND | ND |
| Mature DC | 2222 | 100 | ND | ND | 333 | 3333 | ND | ND |
实验室常用的逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒和腺病毒的主要特征之间的比较和差别参见下表。具体的特定病毒的一些特征和下表相比可能会有一定差异。
| Retrovirus | Lentivirus | AAV | Adenovirus | |
| Genome | ssRNA(+) | ssRNA(+) | ssDNA | dsDNA |
| Coat | Enveloped | Enveloped | Naked | Naked |
| Particle size | 90-100nm | 90-100nm | 20-30nm | 60-90nm |
| Genome size | 7-10kb | 9kb | 5kb | 38-39kb |
| Genome integration | Yes | Yes | No | No |
| Packaging capacity | 2.5-5kb | 2.5-6kb | 2.5-4.5kb | 3-8kb |
| Infection tropism | Dividing cells | Dividing and non-dividing cells | Dividing and non-dividing cells | Dividing and non-dividing cells |
| Relative Transduction Efficiency | ND | 70% | 70% | 100% |
| Expression started | 48-72h | 48-72h | 72-96h | 24-48h |
| Expression duration | > 2 months | > 2 months | > 6 months | 3-4 weeks |
| Expression level | Medium | Medium | Medium | High |
| Immune response | Low | Low | Very low | High |
| In vivo safety | Medium | Medium | High | Low |
| Titer before concentration (IFU/ml) | 106 | 107 | 1011 | 107 |
| Titer after concentration (IFU/ml) | ND | 108 | 0.5-1×1013 | 1010 |
| Able to obtain high MOI | No (≤ 10 copies integrated) | No (≤ 10 copies integrated) | Yes | Yes |
| Biosafety level | BSL-2 | BSL-2 | BSL-1 | BSL-2 |
本产品的滴度为1×1013vp/ml。vp, viral particle,即病毒颗粒。如果用于尾静脉注射8-12周的小鼠,每只小鼠的推荐注射量为2-5×1011vp,此时一个包装的本产品可以用于注射5-12只小鼠。用于小鼠脑内(intracerebal)和心室内(intraventricular)注射的推荐用量是1-5×109vp,用于鼻内(intranasal)注射时的推荐用量为1-3×1010vp,用于眼内(intravitreal)注射时的推荐用量为1-4×109vp。本产品滴度通过Universal AAV Titration Kit by qPCR (C2921)测定。
包装清单:
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C4107-250μl | AAV-CAG-GFP (AAV9, 10^13vp/ml) | 250μl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-80ºC保存,一年有效。-20ºC保存,1-2个月内有效。4ºC保存,一周内有效。
注意事项:
反复冻融会降低病毒滴度,如有必要请在收到本产品后分装保存。分装时必须在冰浴上进行。病毒融解后,如果在一周内使用,可以放置于4ºC。如果-80ºC保存时间超过一年,可能会导致滴度下降,此时建议重新测定病毒滴度,建议使用Universal AAV Titration Kit by qPCR (C2921)。
本产品对于小鼠等动物在体内感染的效率很高,但对大多数常见的体外培养细胞的感染效率很低。因此,本产品适合用于小鼠等动物的体内感染,不太适合用于培养细胞的感染。
如果希望使用本产品之外的其它血清型的AAV-CAG-GFP,可以联系碧云天的技术服务部进行定制。
对于一些比较珍贵的基因敲除或转基因动物或者疾病模型动物,建议先注射1-2个野生型正常小鼠进行预实验,确定注射方式和注射剂量后再开始正式实验。
本产品使用前请仔细阅读附录1《腺相关病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1),没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults),可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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