Amplex Red (荧光红染料)

Amplex Red，又称ADHP、Ampliflu™ Red、10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine、OxiRed Probe、Amplisyn Red或A6550，中文名为荧光红染料或10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，是一种可以用于吸光度或荧光检测的过氧化物酶底物，更加常用于荧光分析检测。

Amplex Red是一种对过氧化氢和过氧化物酶高度敏感的荧光探针，在辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)等过氧化物酶存在的情况下，Amplex Red能与H₂O₂ 1:1反应，产生强烈的红色荧光物质试卤灵(resorufin)，反应原理参见图1。试卤灵的最大激发波长为571nm，最大发射波长为585nm，并且在激发波长处有很强的可见光吸收，可在A570检测吸光度。

图1. Amplex Red与过氧化氢和过氧化物酶的反应原理图。

Amplex Red是目前已知的用于HRP和H₂O₂的检测最灵敏、稳定的荧光探针。在免疫学分析中，Ampelx Red已经广泛地用来检测HRP。与其它商品化的HRP底物相比，如二氢荧光素和二氢罗丹明等， Amplex Red的本底荧光水平更低，受空气氧化的影响也较小。Amplex Red也可以用来示踪H₂O₂总量，基于Amplex Red的H₂O₂检测比常用的东莨菪亭(Scopoletin)检测H₂O₂更加灵敏。由于在许多酶催化的氧化还原反应中都会产生H₂O₂，所以Amplex Red与酶促反应偶联，可以用于许多氧化酶、相关酶或底物以及辅酶因子的检测，例如葡萄糖、乙酰胆碱、胆固醇、L-谷氨酸和氨基酸等的活性。

本产品为棕红色或灰白色结晶状粉末，分子式为C₁₄H₁₁NO₄，分子量为257.24， CAS number 119171-73-2，纯度≥98% (HPLC)。本产品的化学结构式参见图2。

图2. Amplex Red的化学结构式。

本产品难溶于水，微溶于乙醇(1.5mg/ml)，可溶于DMSO (~25 mg/ml)和DMF(~25 mg/ml)。将高纯度的Amplex Red溶解于适当的缓冲溶液后，就可直接用于HRP酶反应，使用十分方便。 包装清单：

-20℃避光保存，至少两年有效。长期保存可置于-80℃。

虽然与其它底物相比，Amplex Red受空气氧化的影响较小，但其在空气中仍然不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中一定要注意适当避光。

本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃或-80℃保存。为减缓氧化，如有条件，可以对储存液充氮气或氩气后保存。

Amplex Red的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，因此使用时最终反应体系中的二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇或类似还原剂的浓度应低于10µM。

请确保使用时反应体系的pH值在7-8之间，否则会影响Amplex Red的稳定性和荧光值。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。