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上海研生
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50T
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荧光定量PCR原理:
荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。
Cygb (cytoglobin) 细胞球蛋白抗原 0.5mg
PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide) 蛋白酶激活受体-2桔抗肽 0.5mg
DLX4 (Dsital-less homebox4 isoformAlpha/ Beta) 末梢同源匡基因多肽片段 0.5mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Ala22) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) 海葵神经毒素(35肽) 0.1mg
rHBcAg 重组乙肝病毒核心抗原 100ug
rHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein) 重组乙肝病毒e抗原 100ug
rDen(rh-Dengue Virus) 多价重组人登革热病毒诊断抗原 100ug
rDen-2(rh-Dengue Virus) 重组人登革热病毒2型诊断抗原 100ug
rSLT/SLT-IIe(O139) 重组猪水肿素蛋白 0.2mg
ADM (Adrenomedullin)(22-52) 肾上腺髓质素(22-52) 0.1mg
ADM (Adrenomedullin)(22-42) 肾上腺髓质素(22-42) 0.5mg
AAT(Alpha-1Anti-tiypsin) α-1抗胰蛋白酶(抗原) 0.5mg
FPP(Fertilization Promoting Peptide) 受精促进肽 10mg
ACEI (Angiotensin I Converting Enzyme Inhibitor ) 血管紧张素1转换酶抑制剂(抗原) 0.5mg
Acinus peptide ACINUS 多肽抗原 0.5mg
猫传染性腹膜炎(FIP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)T4-BSA 甲状腺素T4偶联牛血清白蛋白 1mg
mouse IgA 小鼠IgA 1mg
ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(7-23) 促肾上腺皮质激素(7-23)(抗原) 0.2mg
Insulin (from porcine pancreas) 胰岛素 1mg
Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌动蛋白(抗原) 0.5mg
rHBsAg 重组乙肝病毒表面抗原 100ug
AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪细胞增强结合蛋白1 0.5mg
Melamine/HRP 辣根过氧化物酶标记三聚胺 0.5ml
SP-B peptide 肺表面活性蛋白B抗原 0.5mg
D peptide 异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗原 0.5mg
MMP-9(matrix metalloproteinase 9) 基质金属蛋白酶-9(抗原) 0.5mg
AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor) 晚期糖基化终末产物特异性受体(抗原) 0.5mg
14-3-3 protein 14-3-3 蛋白(多肽抗原) 0.5mg
14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris)) 植物14-3-3蛋白抗原 0.5mg
FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 1mg
AIF (Apoptosis-Inducing Factor) 调亡诱导因子(多肽片断抗原) 0.5mg
Adenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1 0.5mg
Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原) 0.5mg
2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 2,4-二氯苯氧乙酸偶联血蓝蛋白 5mg
2,4-D/BSA 2,4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白 1mg
CA153/MUC1/KL-6 peptide 乳腺癌相关抗原 0.5mg
ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag) 间变型淋巴瘤激酶(抗原) 0.5mg
5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP) 5-羟色胺 20mg
AM (Adrenomedullin; ADM) 肾上腺髓质素(多肽抗原) 0.1mg
5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A) 5-羟色胺受体1A(多肽) 0.5mg
Annexin Ⅲ peptide 膜粘连蛋白A3抗体 0.5mg
TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金属蛋白酶组织抑制因子-2(抗原) 0.5mg
特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除TIANDZ公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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文献和实验染料(如Hoechst染料)染色时,就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。DNA法则可以准确的将分离培养法不能检测的支原体M. hyorhinis菌株检测出来。国际支原体组织(IOM)推荐分离培养法和DNA荧光染色法作为常规检测方法。 但最近PCR法的发展令人鼓舞 ↓ 05 PCR检测法 PCR法检测支原体只需几个小时,是最快也是最灵敏的支原体检测方法。该方法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本,其中PCR引物通常针对支原体的16S rRNA基因。在凝胶电泳过程中
是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化,而此阶段Propidium Iodide(PI)不能通过细胞膜。细胞坏死时,虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻,但此时细胞膜的通透性明显增加,PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合,发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI
的Fl区段为起点,以自身为模板,进行DNA合成延伸。与此同时,FIP引物F2与环上单链F2c杂交,启动新一轮链置换反应。解离由F1区段合成的双链核酸。同样,在解离出的单链核酸上也会形成环状结构。在环状结构上存在单链形式B2c,BIP引物上的B2与其杂交,启动新一轮扩增。经过相同的过程,又形成环状结构。通过此过程,结果在同一条链上互补序列周而复始形成大小不一的结构。 3.LAMP扩增产物的检测;(1)荧光定量检测:利用SYBR Green工荧光染料只与双链DNA小沟结合,当它与DNA双链结合时
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