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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 保质期:
6个月
- 供应商:
赫澎生物
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
20次
产品内容
HEPENGBIO硫化液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO固着液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO脱蜡液(Reagent C) 毫升
HEPENGBIO补水液A(Reagent D) 毫升
HEPENGBIO补水液B(Reagent E) 毫升
HEPENGBIO补水液C(Reagent F) 毫升
HEPENGBIO清理液(Reagent G) 毫升
HEPENGBIO染色液A1(Reagent H1) 毫升
HEPENGBIO染色液A2(Reagent H2) 瓶
HEPENGBIO染色液A3(Reagent H3) 毫升
HEPENGBIO染色液B(Reagent I) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里,避免光照;有效保证3月
用户自备
PBS缓冲液:用于灌注
无离子水:用于组织清洗
1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器
无菌镊子:用于转移动物脑组织
小型玻璃染色缸:用于组织或切片处理的容器
切片机:用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片:用于切片后铺片
中性树脂:用于切片封片
光学显微镜:用于切片染色后观察分析
实验步骤
- 样本固着处理
- 常规麻醉动物和手术(建议:使用用户自备的4℃预冷的PBS由心脏处灌注约5至10分钟,去除血液直至澄清,肝脏显示灰白)
- 使用适量的(xx毫升)4℃预冷的HEPENGBIO硫化液(Reagent A)灌注处理(建议:至少10分钟,肝脏显示发黑)
- 使用适量的(xx毫升)4℃预冷的HEPENGBIO固着液(Reagent B)灌注处理
- 即刻小心取出脑组织(组织显示蓝灰色调)
- 小心放进xx毫升HEPENGBIO固着液(Reagent B)里
- 置于4℃冰箱里浸泡孵育60分钟
- 转移到xx毫升HEPENGBIO硫化液(Reagent A)里
- 置于4℃冰箱里浸泡孵育30分钟
- 即刻用无菌镊子夹起组织块
- 放进用户自备的无离子水清洗2分钟
- 用绵纸吸干组织快
- 即刻进行常规4℃冰箱里30%蔗糖脱水过夜和石蜡处理后包埋
- 取出组织块,进行缓慢石蜡切片为20至100微米厚,并铺片在明胶化载玻片上
- 脱蜡处理
-
- 取出10片待测的20至100微米厚的石蜡包埋的组织切片
- 按下表依次放进小染色缸里孵育
| 染色缸 | 孵育时间 |
| xx毫升HEPENGBIO脱蜡液(Reagent C) | 15分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO脱蜡液(Reagent C) | 15分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO脱蜡液(Reagent C) | 15分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO补水液A(Reagent D) | 3分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO补水液B(Reagent E) | 3分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO补水液C(Reagent F) | 3分钟 |
| xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent G) | 3分钟 |
小心移去切片上的HEPENGBIO清理液(Reagent G)
- 样本染色处理
染色开始前,移取xx毫升HEPENGBIO染色液A3(Reagent H3)到1瓶HEPENGBIO染色液A2(Reagent H2),充分混匀后,再加入到1瓶HEPENGBIO染色液A1(Reagent H1)中,充分混匀;然后移取2毫升染色液A混匀液到2.2毫升离心管,加入50微升HEPENGBIO染色液B(Reagent I),混匀后,标记为HEPENGBIO染色工作液(10张切片染色),置于暗室里备用。然后进行下列操作
- 小心加上200微升HEPENGBIO染色工作液,铺满整个切片样品表面
- 在26℃温度下孵育50分钟,避免光照
- 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液
- 室温下,小心将切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent G)中孵育10分钟
- 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液(Reagent G)
- (选择步骤)进行复染操作(建议使用HEPENGBIO甲苯酚紫(CRESYL VIOLET)复染试剂盒-HEPENGBIO80052或HEPENGBIO中性红复染试剂盒—HEPENGBIO80068)
- 透明处理
- 放上盖玻片或封片(中性树脂)
- 即刻在一般光学显微镜下观察:含锌神经细胞体,例如锥体细胞、齿状颗粒细胞、突触泡囊等,呈现棕黑色(如果复染――细胞核呈现蓝色,胞浆尼氏(体)物质呈现粉红至紫色)
- 齿状回内分子层苔藓纤维出芽(mossy fiber sprouting)评分
| 评分 | 特征 |
| 0 | 未见颗粒 |
| 1 | 偶见颗粒 |
| 2 | 较多颗粒,不连续分布 |
| 3 | 较多颗粒 |
| 4 | 较多颗粒,连续分布 |
| 5 | 颗粒致密成层状带 |
- 其它结构区域染色评分
| 评分 | 特征 |
| 0 | 染色阴性 |
| 1 | 染色很浅 |
| 2 | 染色较浅 |
| 3 | 中等染色 |
| 4 | 致密较深染色 |
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文献和实验首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml
度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和 溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少
蛋白质粘性的影响几乎可忽略不计。国产的火焰光度计,广为临床使用。 ⒉化学测定法 主要利用复环王冠化合物如穴冠醚或球冠醚,亦称为冠醚,均为离子载体进行测定,由于大环结构内有空穴,分子内部氧原子有未共用电子对可与金属离子结合,根据空穴大小,可选择性结合不同直径的金属离子,从而可达到测出离子浓度的目的。测定血清K,一般采用普通冠醚阴离子染料进行比色定量。 ⒊离子选择电极法 ISE法是采用灵敏的特定专用电极,在专用仪器上进行血清和尿等体液的K+、Na+的测定,因标本用量少,快速准确,几乎有取代
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