DH5α大肠杆菌菌株 HP-B0201 0.5 ml

原核表达操作步骤及注意事项

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点： 易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。 表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达

大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化

苄青霉素的平板培养基上培养，只有转化体才能存活，而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。影响转化率的因素细胞生长状态和密度。转化的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。离心设备 实验试剂 大肠杆菌DH5α LB培养基， 0.1mol/LCaCl2溶液（预冷） 氨苄青霉素 pUC18质粒 实验步骤 菌株活化: 1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α，在LB培养基平板表面划线，于37℃培养16小时 2.挑取一个单菌落，转到3－

重组腺病毒构建、扩增及纯化

平板（25-50mg/ml），37℃培养16-20hr. 7、次日挑取平板上长出的菌落（选择最小的菌落），接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8、碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb），及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9、取1-5ul 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183