- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB726020-14
- 中国
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Microsporum gypseum
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Microsporum gypseum
实时荧光定量PCR技术（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针)，对PCR产物进行标记跟踪，随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化，并结合相应软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，从而计算待测样品中目的基因初始模版的量，常用于分析目的基因的表达水平的变化。它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2.根据石膏样小孢子菌保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3.灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 石膏样小孢子菌染料法 qPCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 石膏样小孢子菌染料法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 核酸释放剂（试用装） | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法 一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万 不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对 照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的 PCR 阳性对照的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓度为 1×10E5 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求 的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。如果每次制备需要 200μL 样品， 则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。
9. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本 试剂盒免费赠送 15 次一管式病毒 DNAout，
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
10.如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复，则 反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。
11.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | PCR阳性对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 石膏样小孢子菌染料法 qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） |
不加 | 不加 | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ |
1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号） |
|
| 按仪器预设程序进行熔解曲线分析 | ||
13.具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光谱在 530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。
四、数据处理
14. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵 轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
15. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为 阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则 为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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文献和实验名称：实验动物真菌监测标准操作规程(SOP)关键词：实验动物真菌监测目的：规范实验动物真菌监测的具体过程，确保监测结果可靠。主体内容：引起实验动物皮肤真菌病的病原菌，主要是石膏样毛癣菌、石膏样小孢子菌和羊毛状小孢子菌三种，这三种菌的检查是实验动物真菌学监测的核心内容。不论是从动物皮肤病灶处，或是从非病灶处分离出这三种菌，均视为异常。因为非病灶处的真菌很可能随后引起实验动物真菌感染，同时对饲养和实验人员构成威胁。1．检测程序动物皮毛、鳞屑↓沙氏培养基斜面↓ 28℃，7～14d菌落观察↓涂片镜检↓
观察1. 菌丝的形态（1）梳状菌丝：菌丝一侧有多数短的分枝，间距不等，形如梳子，故名梳状菌丝常见于许兰氏毛菌。（2）螺旋状菌丝：某些菌丝呈螺旋状弯曲，常见于石膏样小孢子菌和许兰氏毛菌。（3）球拍样菌丝：在菌丝分节处一端膨大，如网球拍样，常见于小孢子菌（microsporum）及表皮癣菌(epidermophyton)。（4）结节状菌丝：菌丝缠绕成结节样，常见于奥杜盎小孢子菌等。（5）鹿角状菌丝：菌丝末端膨大成鹿角状，多见于许兰氏毛菌。（6）假菌丝：酵母菌（如：白假丝酵母菌）的菌体细胞延长分枝后并不脱落，形成
的病原菌：农村主要是许兰氏毛癣菌、断发毛癣菌等；城市为堇色毛癣菌，铁锈色癣菌等。手足癣、体癣股癣及甲癣的病原菌以红色毛癣菌最常见，其次为石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌等。 此外如足癣抓破时，癣菌成份入血，可传至其他部位（如上肢），引起变态反应，在皮肤上呈现丘疹水泡。在病损处找不到癣菌，称癣菌疹，是一种变态反应疾病。 癣病患者可出现迟发型变态反应，用毛癣菌素（Trichphytin）作皮肤试验，出现阳性。
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