- ￥2990
- YBio/钰博生物
- YB71700y-14
- 中国
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) SYBR qRT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) SYBR qRT-PCR Kit
低温运输，-20℃保存
猪内源性逆转录病毒(Porcine Endogenous Retrovirus,PERV)是一种 RNA
病毒，在猪身体里不会有毒性，当猪的细胞和人的细胞接触时，内源性逆转录病
毒会从猪的基因组“跳”到人的基因组中，该猪内源性逆转录病毒成为人体移植
利用猪器官面临的一个重大医疗风险问题，因此猪内源性逆转录病毒的快速准确
鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于 PCR 原理开发。它具有下列
特点：
1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据猪内源性逆转录病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达
到至少 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中
间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 30μL 体系的 RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：
| 成分 | 编号 | 小纸盒包装 |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 试剂一 | 500 μL（棕色管） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 试剂二 | 100 μL（红盖） |
ROX 染料 I，50× |
试剂三 | 20 μL（棕色管） |
| ROX 染料 II，50× | 试剂四 | 20 μL（棕色管） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 试剂五 | 1mL（黄盖） |
| 猪内源性逆转录病毒qRT-PCR 引物混合液 | 试剂六 | 100 μL（白盖） |
| 猪内源性逆转录病毒qRT-PCR阳性对照（1×10E8拷贝/μL） | 试剂七 | 50 μL（黄盖） |
| 天净沙核酸释放剂（试用装） | 试剂八 | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 一份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 RNA 片段作为阳性对照。
自备试剂：样品 RNA。
使用方法：一、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入 45 μL荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
2. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
3. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
5. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。
6. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
7. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液做模板）。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
8. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：
| 成分 | N+2 个制备 所得样品 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性 对照（2-7 管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各 10μL |
| 猪内源性逆转录病毒qRT-PCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各 2μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各 0.4μL |
| 样品制备所得 RNA 模板（来于第 8 步） | 5.6μL | - | - |
| 稀释所得 6 个阳性对照 （来于第 6 步） |
- | - | 各 5.6μL（2 号样到 2 号管， 3 号样到 3 号管…） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
注:需使用 ROX 染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX 染料 II 的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的 Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。不需要使用 ROX 的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。
9.上机后按下面参数进行 RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| PT（逆转录） | 50℃ | 2min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| qPCR反应（40个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集SYBR通道的荧光信号） |
10.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于
或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于
或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等
于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验如果您的样本是组织，取样的过程非常重要。组织内部是有内源性 RNase 存在的，组织离体后内源性 RNase 则开始发挥作用，RNA 产生降解。所以离体的组织必须立马放在液氮中速冻，之后转移至 -80℃ 长期保存，且避免反复冻融。研磨组织的过程中需要保证在液氮环境中研磨。RNA 提取的过程中，保证样本的上样量不超过提取试剂盒说明书中规定的最大上样量，上样量过多，同样会造成 RNA 降解。 ②如果您的样本是细胞，则样本搜集过程要简单的多了，只要保证细胞状态良好（细胞状态差也容易造成提取的 RNA 降解
。临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足，基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下，利用现有的试剂研发平台，人感染猪流感实时荧光定量PCR诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量PCR技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前，针对猪与猪传染的传统猪流感疫情，近年来我国科技人员经过不懈努力，探索快速检测与诊断方法].人感染猪流感疫情发生后，美国疾病预防控制中心（CDC）于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南
一种用于肝素粗品质量监测的、检测原料药中反刍动物DNA的多重RT-PCR分析方法的开发
动物源污染的实时荧光定量PCR技术。该检测法由一套针对反刍动物（牛、绵羊、山羊）和猪的冻干引物、探针及扩增内标组成。该方法经过两处分析机构验证：第一个位于FDA，第二个位于某州独立实验室。肝素钠多重实时荧光定量PCR（hMRTA）检测方法性能通过了美国FDA兽药中心研发处制定的特异性、灵敏度和专一性严格验收标准。符合早前建立的饲料中反刍动物原料多重实时荧光定量PCR检测法的灵敏度和重复性要求。hMRTA法检测猪源肝素钠粗品，98%达灵敏度，真阳性98%、假阴性2%。PCR检测法检测三个反刍动物物种，可作
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
