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西安百萤生物科技有限公司
产品介绍
用于活细胞细胞表面染色的一些染料标记的荧光抗体缀合物通常在单核细胞和巨噬细胞中表现出非特异性结合。CytoWatch QZ100单核细胞封闭剂是一种非基于抗体的封闭溶液，经过优化可封闭基于花青的染料缀合物的非特异性背景。它可以有效地消除花青染料缀合物（例如PE / Cy5，PE / Cy7，APC / Cy7，PE / Dazzle 594，APC / Fire 750，PE / AlexaFluor®647， PE / AlexaFluor®750，APC / AlexaFluor®750，PE /iFluor®647，PE /iFluor®750和APC /iFluor®750）。该试剂对活淋巴细胞，单核细胞和粒细胞的特定表面染色没有影响。
实验方案
流式细胞仪分析的细胞表面染色方案
1.向100 µL PBMC或全血中加入5 µL CytoWatch QZ100单核细胞封闭试剂。
2.在室温下孵育5-10分钟或立即添加一抗，然后在室温下孵育20分钟。
3.用细胞染色缓冲液洗涤两次。
4.将细胞重悬于0.5 mL细胞染色缓冲液中。
5.进行流式细胞仪分析。
图示
图1.未经处理（左）或用CytoWatch QZ100单核细胞封闭剂（右）处理人外周血，并用CD3（克隆UCHT1）PE /Cy5染色。
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文献和实验性染色。其中，以单核细胞、巨噬细胞尤甚。 此外，除 Fc 受体的影响外，在活细胞的表面染色实验中，单核细胞和巨噬细胞均存在吞噬抗体或与荧光染料发生非特异性结合的现象。并且，在多色流式实验中，还存在荧光背景的影响及药物处理的影响，即便对 Fc 受体进行了封闭，在分群不好的情况下，依然需要用到同型对照。此时，同型对照的使用也就十分重要。 实验时，如果仅仅参照空白对照来圈门，就可能出现一部分假阳性结果。如果参考同型对照来区分阴阳性，就能够把这部分非特异性结合造成的假阳性排除。 FcR分子 目标
实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原
做了很久的 WB（western blot），走了很多弯路，其实发现 WB 想要做好并不难，总结了 WB 实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题 1：转膜不充分 (1) 膜没有完全均匀湿透 使用 100% methanol 浸透膜。 (2) 靶蛋白分子量小于 10 000 选择小孔径的膜，缩短转移
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