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- 2025年12月25日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
TTC染色
一、技术原理与生物学意义
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化学机制
TTC为无色脂溶性化合物，在活细胞线粒体脱氢酶（如琥珀酸脱氢酶）催化下被还原为红色不溶性甲臜（Formazan）。坏死或严重缺血组织因酶活性丧失无法显色，形成红-白对比。- 反应式：TTC + 脱氢酶 → 甲臜（红色）
- 特异性：仅标记存活组织，无法区分凋亡与正常细胞。
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生物学意义
- 缺血损伤分级：红色区域代表存活组织，白色为梗死核心，交界区提示可逆性损伤。
- 动态监测：染色强度与线粒体功能正相关，可用于评估再灌注治疗效果。
二、实验流程与关键技术参数
（一）标准化操作流程
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样本制备
组织类型 处理要点 文献依据 脑组织 断头后2分钟内取脑，冰生理盐水冲洗血管残留血液，-20℃速冻20分钟切片（厚度1-2mm） 心肌 Langendorff灌注系统冲洗心脏，避免凝血块干扰；切片厚度需≤2mm 植物器官 新鲜取材后立即染色，避免脱水导致假阴性 -
染色步骤
切片浸入2% TTC溶液37℃避光孵育15-30分钟4%多ju甲醛固定30分钟PBS漂洗去除未反应染料图像采集与分析- 关键参数：
- 浓度：1-2%（脑组织常用2%，心肌可降至1%以减少背景染色）
- 温度：37℃恒温（低于30℃反应速率显著下降）
- 避光：全程锡箔纸覆盖防止光降解。
- 固定与保存
- 固定液选择：10%中性甲醛或4%多ju甲醛，避免酸性固定剂导致甲臜溶解。
- 长期保存：4℃避光保存，定期更换固定液防止褪色。
（二）定量分析方法
- 图像处理软件
- ImageJ：
- 步骤：Split Channels → Threshold红色通道 → Analyze Particles计算梗死面积。
- 精度：误差<5%（需标准化光源与白平衡）。
- 深度学习算法：基于U-Net模型自动分割缺血区域，准确率>90%。
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计算公式
梗死体积占比=(1−染色区域体积总组织体积/总组织体积染色区域体积)×100%- 适用性：需连续切片三维重建，适用于脑卒中模型。
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文献和实验心包膜，将心脏推出体外，暴露左冠状动脉前降支，用6-0无菌丝线快速结扎，打活结，看到心脏底部变白，用荷包缝法迅速关闭胸腔，挤压防止气胸，造成左室前壁心肌缺血。分别记录术前、缺血时心电图变化。 到达缺血时间以后，解开活结，再次关闭胸腔，缝合肌肉皮肤，进行心肺复苏。分别记录术前、缺血时和再灌注后的心电图变化。造模成功后进行药物治疗，术后观察动物活动、采食情况。处死前对实验动物采血。术后进行心肌组织取样、TTC-Evans blue染色，进行心梗面积计算。 4、实验操作及检测
范围的心肌是发白色的，如图6 （10）闭合胸腔，注意将胸腔内的空气挤出（这点非常关键，这个模型最容易失败导致大鼠死亡的就是这个地方），对肌肉和皮进行缝合，挤空气的手法如图7 （11）结扎术后6小时可进行TTC染色：将大鼠脱颈处死，打开胸腔，将心脏剪下，用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血，沿冠状沟将心房切除留下心室，用刀片将心脏切成1mm厚的切片，放入0.1%的TTC磷酸盐缓冲液（pH 7.4）37℃水浴7~10分钟，取出切片用生理盐水冲洗数次，观察结果。非梗死区因脱氢酶还原
。所以对手术后模型是否成功应该进行筛选的。 另一方面，如果你做了预防给药，药效的作用也容易被认为是模型不成功，这也需要后边进行脑组织染色和组织血检查进行验证。脑组织检查时可剔除模型不成功以及SAH的个例。 故实验在手术后要进行行为学评分，试验结束时应对脑组织进行组织学检查或染色。TTC染色是采用的宏观标本染色，确定梗死面积可采用体积法或面积法，但最好用扫描仪将脑组织切片进行扫描，选择合适的软件统计梗死面积。 3.大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型，梗死体积出现的最小时间点可能为2h，体积随时间
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