沙门氏菌通用PCR试剂盒

产品简介：
沙门氏菌属通用（Salmonella spp.）是一种常见的食源性致病菌引起沙 门氏菌病的，属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。按其抗原成分，可分为甲、 乙、丙、丁、戊等群。其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙 组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的 伤寒杆菌和肠炎杆菌等。除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类 的疾病外，大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但有时也可污 染人类的食物而引起食物中毒。引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中 所占数量比例非常高。在我国，70-80%细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引 起的，沙门氏菌的检测已成为食品质量安全监控的必检卫生指标。因此快速灵 敏检测沙门氏菌具有重要的意义，本试剂盒就是为此目的根据 PCR 原理开发， 它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增沙门氏菌，包括甲到戊群的沙门氏
菌。但跟非沙门氏菌无交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
沙门氏菌通用PCR 引物混合液	13-32800yw	100 μL（白盖）
沙门氏菌通用PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-32800pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-32800sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
沙门氏菌通用PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
样品制备阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
样品制备阳性对照（沙门氏菌通用PCR 阳性对照的 100倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	58℃	15 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 526bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。