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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Neisseria meningitidis Group A
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
Neisseria meningitidis Group A
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增脑膜炎奈瑟菌A群序列,与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 脑膜炎奈瑟菌A群PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 脑膜炎奈瑟菌A群PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是脑膜炎奈瑟菌A群PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 脑膜炎奈瑟菌A群PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(脑膜炎奈瑟菌A群PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验生物学性状 (1)肾形的革兰阴性双球菌,凹面相对。在患者脑脊液中,多位于中性白细胞内,形态典型。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。 (2)营养要求较高,专性需氧,在5%CO2条件下生长良好。在巧克力色培养基上形成似露滴状菌落。细菌培养超过48h易裂解自溶。 (3)抗原结构与分类1)荚膜多糖抗原 具有群特异性,将本菌分为A,B,C,D,X,Y,Z,29E,W135和L10个血清群。我国建立了H,I,K3个三个新血清群,总计13个血清群。国内一直以A群为主。C群致病力最强
脑膜炎奈瑟菌的临床意义是检验主管技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。 致病物质:菌毛,荚膜,内毒素。 所致疾病:脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热,皮肤瘀斑,脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部,借飞沫经空气传播,冬末春初为流行高峰。
脑膜炎奈瑟菌的生物学特性是检验主管技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。 (1)形态与染色:为革兰阴性双球菌,菌体呈肾形,成对排列,坦面相对,菌体直径0.6~1.5μm,在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。 (2)培养特性:营养要求高,属苛养菌,必须在含有血清或含有多种氨基酸,无机盐等物质的培养基上生长良好。 (3)生化反应:绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖,借此与之鉴别),触酶
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