恙虫病东方体PCR试剂盒

产品简介：
恙虫病又名丛林斑疹伤寒，是由恙虫病东方体（恙虫病立克次体，Orientia
tsutsugamushi）引起的急性传染病，系一种自然疫源性疾病，啮齿类为主
要传染源，恙螨幼虫为传播媒介。病患者多有野外作业史，潜伏期 5～20 天。
临床表现多样、复杂，合并症多，常可导致多脏器损害。本病起病急，有高
热、毒血症、皮疹、焦痂和淋巴结肿大等特征性临床表现。严重者可因心肺
肾衰竭而危及生命。因此快速灵敏检测恙虫病东方体具有重要意义。本产品
是根据 PCR 原理开发的恙虫病东方体检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增恙虫病东方体，与其他病原没有交
叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
恙虫病东方体PCR 引物混合液	13-41000yw	100 μL（白盖）
恙虫病东方体PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-41000pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-41000sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 恙虫病东方体 PCR 阳性对照的 100 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
恙虫病东方体PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（恙虫病东方体PCR 阳性对照的 100倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	58℃	30sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 153bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。