锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR试剂盒

产品简介：
锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus），简称 KHV。因其主要是由 DNA 类
疱疹滤过性病毒感染所引起，又名鲤鱼肾炎及鳃坏疽病毒，亚洲地区于 2004
年也被报导感染锦鲤疱疹病毒。我国将其列为二类动物疫病，是世界动物卫生
组织（OIE）必须申报的疾病。因此对锦鲤疱疹病毒进行快速灵敏的诊断具有重
要的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，针对聚合酶基因
(Sph)进行 PCR 检测，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增锦鲤疱疹病毒 Sph 基因。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR 引物混合液	13-73900byw	100 μL（白盖）
锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908- 73900bpc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-73900bsc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 锦鲤疱疹病毒 Sph 基因 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得 到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	63℃	15 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5.取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 292bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任 何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。