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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Avian Adenovirus
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
Avian Adenovirus
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增禽腺病毒序列,与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 禽腺病毒PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 禽腺病毒PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是禽腺病毒PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 禽腺病毒PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(禽腺病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验核酸提取 试剂 核酸扩增或转录——核酸扩增 试剂 产物检测试剂(有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成,故无专门的产物检测试剂) 寡核苷酸引物和探针 缓冲液和dNTP 聚合酶 、逆转录酶等 更多详细内容: 马上下载
请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分?
各位老师: 您们好!偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因,并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A),得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
和一种使受感染细胞发生早期病变的毒性物质。从每个五邻体上伸出1根长短不同的线状突起,称为纤维,具有血凝特性和型特异性抗原(见图)。基因组为线型dsDNA(双链DNA),分子量为腺病毒结构模式图(20~30)×106 ,与内部蛋白结合构成核心。人腺病毒可在人胎肾及多种人传代细胞中繁殖。DNA复制和病毒粒的装配都在细胞核内完成,蛋白质在细胞质内合成后,输入核内并聚合成壳粒。禽腺病毒能使鸡胚死亡或萎缩,也可在鸡胚细胞培养中生长。腺病毒耐脂溶剂,对多种酶有抵抗力,对酸碱度及温度的耐受范围较宽
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