CTP2-CP4-EPSPS转基因构建探针法荧光定量PCR试

CTP2-CP4-EPSPS转基因构建探针法荧光定量PCR试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
磷酸化组蛋白H3抗体    CR4 ELISA Kit    补体受体4(CR4)ELISA试剂盒
组蛋白去乙酰化酶5抗体    CR2 ELISA Kit    补体受体2(CR2)ELISA试剂盒
A型流感病毒H5N1凝集素    C9 ELISA Kit    补体成分9(C9)ELISA试剂盒
人巨细胞病毒UL49蛋白抗体    C8γ ELISA Kit    补体成分8γ(C8γ)ELISA试剂盒
肝细胞核因子1β/HNF-1β抗体    C8β ELISA Kit    补体成分8β(C8β)ELISA试剂盒
HHLA3蛋白抗体    C7 ELISA Kit    补体成分7(C7)ELISA试剂盒
HHIP样蛋白2抗体    C6 ELISA Kit    补体成分6(C6)ELISA试剂盒
A型流感病毒H3N2-M2蛋白抗体    C5a ELISA Kit    补体成分5a(C5a)ELISA试剂盒
HSH2D抗体    C5 ELISA Kit    补体成分5(C5)ELISA试剂盒
水蛭素抗体    C4d ELISA Kit    补体成分4d(C4d)ELISA试剂盒
白细胞抗原抗体A抗体    C4b ELISA Kit    补体成分4b(C4b)ELISA试剂盒
人乳头瘤病毒16型E7抗体    C4 ELISA Kit    补体成分4(C4)ELISA试剂盒
人类乳头状瘤病毒58 E6蛋白抗体    C3aR1 ELISA Kit    补体成分3a受体1(C3aR1)ELISA试剂盒
人类乳头状瘤病毒16抗体    C3 ELISA Kit    补体成分3(C3)ELISA试剂盒
人类乳头状瘤病毒18 E7抗体    C2 ELISA Kit    补体成分2(C2)ELISA试剂盒
人类乳头状瘤病毒31 E7抗体    C1s ELISA Kit    补体成分1s(C1s)ELISA试剂盒
转录因子HES2抗体    C1r ELISA Kit    补体成分1r(C1r)ELISA试剂盒
转录因子HES3抗体    C1qL1 ELISA Kit    补体成分1q子成分样蛋白1(C1qL1)ELISA试剂盒
多磷酸肌醇激酶IPMK抗体    C1qC ELISA Kit    补体成分1q子成分C(C1qC)ELISA试剂盒
IKK复合物相关蛋白抗体    C1qA ELISA Kit    补体成分1q子成分A(C1qA)ELISA试剂盒
IQSEC2抗体    C5c ELISA Kit    补体C5转化酶(C5c)ELISA试剂盒
交叉蛋白2抗体    C3c ELISA Kit    补体C3转化酶(C3c)ELISA试剂盒
三磷酸肌苷焦磷酸酶抗体    C3a ELISA Kit    补体3a(C3a)ELISA试剂盒
吲哚胺2,3-双加氧酶抗体    C1INH ELISA Kit    补体1抑制因子(C1INH)ELISA试剂盒
白细胞介素19抗体    BLMH ELISA Kit    博来霉素水解酶(BLMH)ELISA试剂盒
抑制素A/Inhibin α抗体    VIT ELISA Kit    玻璃体蛋白(VIT)ELISA试剂盒
胰岛素基因增强结合蛋白1/2抗体    PDP ELISA Kit    酸脱氢酶磷酸酶(PDP)ELISA试剂盒
磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体    PDK4 ELISA Kit    酸脱氢酶激酶同工酶4(PDK4)ELISA试剂盒
磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体    PDHβ ELISA Kit    酸脱氢酶β(PDHβ)ELISA试剂盒
磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体    PDHα ELISA Kit    酸脱氢酶α(PDHα)ELISA试剂盒
干扰素调节因子3    PC ELISA Kit    酸羧化酶(PC)ELISA试剂盒
磷酸化干扰素调节因子3    TPI1 ELISA Kit    丙糖磷酸异构酶1(TPI1)ELISA试剂盒
干扰素调节因子7抗体    AAP ELISA Kit    丙氨酸氨肽酶(AAP)ELISA试剂盒
磷酸化干扰素调节因子7抗体    ASCT1 ELISA Kit    丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运蛋白(ASCT1)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    AP ELISA Kit    别孕烯醇酮(AP)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    TGM3 ELISA Kit    表皮转谷氨酰胺酶(TGM3)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    EREG ELISA Kit    表皮调节素(EREG)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    EPN3 ELISA Kit    表皮生长因子途径底物蛋白3(EPN3)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    EPN2 ELISA Kit    表皮生长因子途径底物蛋白2(EPN2)ELISA试剂盒
磷酸化胰岛素受体底物-1抗体    EPN1 ELISA Kit    表皮生长因子途径底物蛋白1(EPN1)ELISA试剂盒
白细胞介素28B抗体    EGFR2 ELISA Kit    表皮生长因子受体2(EGFR2)ELISA试剂盒
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
CTP2-CP4-EPSPS转基因构建探针法荧光定量PCR试剂盒8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。