小麦内标准PKABA1基因LAMP试剂盒

小麦内标准PKABA1基因LAMP试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTXⅡ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cross Linked C-Telopeptide Of Type II Collagen (CTXII)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
软骨寡聚基质蛋白(COMP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
纤维胶凝蛋白2(FCN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Ficolin 2 (FCN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Aggrecan (AGC)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
p53上调凋亡调节因子(PUMA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for p53 Upregulated Modulator Of Apoptosis (PUMA)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血小板亲和蛋白1(PKP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Plakophilin 1 (PKP1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
激肽释放酶7(KLK7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Kallikrein 7 (KLK7)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
S抗原(SAG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for S Antigen (SAG)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cζ(PKCζ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Protein Kinase C Zeta (PKCz)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
白介素5(IL5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interleukin 5 (IL5)    48T/96T    Cavia (Guinea pig )
尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4 (NOX4)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
Smad同源物4(Smad4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4 (Smad4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
趋化因子C-C-基元受体4(CCR4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Receptor 4 (CCR4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 2 (ANGPTL2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
干扰素γ诱导单核因子(MIγ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Monokine Induced By Interferon Gamma (MIg)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Protein Kinase C Alpha (PKCa)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
小麦内标准PKABA1基因LAMP试剂盒防御素α5(DEFα5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific (DEFa5)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
溶菌酶(LZM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Lysozyme (LZM)    48T/96T    Chicken (Gallus)
型胆碱受体α4(CHRNα4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cholinergic Receptor, Nicotinic, Alpha 4 (CHRNa4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
甲酰肽受体2(FPR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Formyl Peptide Receptor 2 (FPR2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
布鲁东氏酪氨酸激酶(Btk)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Bruton'S Tyrosine Kinase (Btk)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷脂酰丝氨酸受体(PSR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phosphatidylserine Receptor (PSR)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白(WASP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Wiskott Aldrich Syndrome Protein (WASP)    48T/96T    Homo sapiens (Human)序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。