斑节对虾杆状病毒PCR试剂盒

产品简介：
斑节对虾杆状病毒（Penaeus Monodon-type Baculovirus，MBV)是引 起多种对虾生病的流行性传染病，发病后常常会导致病虾食欲减少，活动呆滞， 鳃、附肢和体表常带有大量的附生生物，受感染后幼体除部分体色加深外，并 无特别的症状，多数携带病毒的虾活动仍正常。幼体群常常无明显的症状表现 而出现大量死亡，死亡率与养殖环境有关，该病毒的感染对海产养殖业往往会 造成较大的经济损失，因此快速检测斑节对虾杆状病毒具有重要意义。本试剂 盒根据荧光定量 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增斑节对虾杆状病毒，与其他病毒没
有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
斑节对虾杆状病毒PCR 引物混合液	13-51400yw	100 μL（白盖）
斑节对虾杆状病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-51400pc	50 μL（黄盖）
DNA 病毒裂解液（试用装）	3674a	15 次（9 mL））
使用手册	13-51400sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液（一管式病毒 DNAout）。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 斑节 对虾杆状病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照 是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个样品） 放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑制物很 可能会抑制 PCR。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
斑节对虾杆状病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（斑节对虾杆状病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	2 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	5 min

三、电泳检测
5. 取 10μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增 结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物 长度为 123 bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增， 否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增 以排除 PCR 抑制剂的感染