LDH细胞毒性分析试剂盒

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齐源生物专业代理美国Cayman，美国Cayman公司成立于1980年6月6日，其创始人和首席执行官柯克·麦克西（Kirk Maxey）博士的目标是诞生，以证明自然增长的高粱珊瑚作为可再生的，经济上可行的前列腺素的价值。仔细的环境研究和与大开曼岛政府的谈判在1981年8月达到高潮，当时在渔人堡附近收集了八磅重的高粱Plexaura homomalla样本。珊瑚被冷冻并运到丹佛的一个小实验室，在那里有30克的前列腺素A 2被提取。受到这一成功以及向研究界提供负担得起的高质量前列腺素的愿景的鼓舞，Maxey博士的新生实验室提供了五种前列腺素标准品。1981年11月，开曼化学关闭了第一笔销售！在丹佛市发展了数年之后，总部迁至密歇根州的安阿伯市，在那里，Cayman建立了第一个完整的合成化学实验室。
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Cayman's LDH细胞毒性试验试剂盒测定细胞对化学反应的死亡使用耦合两步反应的化合物或环境因素。在第一步，LDH催化氧化还原NAD*到NADH和H”在反应的第二步，黄递酶使用新形成的NADH和H催化四唑盐（INT）还原反应在490-520nm处有强烈吸收的高色福尔马赞。金额福尔马赞的产量与乳酸脱氢酶的释放量成正比作为细胞毒性的结果的培养基。在典型的细胞毒性试验中，靶细胞与细胞毒性化学物质一起培养诱导靶细胞死亡的药剂或细胞毒性细胞（NK细胞、细胞毒性T细胞）
乳酸脱氢酶释放。将含有乳酸脱氢酶的上清液转移到培养孔中一个新的96孔分析板并与LDH反应液混合。之后室温孵育30分钟，吸光度在490 nm（A490）使用读板器读取每个实验的结果以细胞毒性百分比计算靶细胞内乳酸脱氢酶的总量。因此，对于每个实验中需要有一套控制井中所有的目标细胞使用试剂盒中提供的10%Triton X-100溶液杀死。这些是最大释放井。而且，在每个实验中都需要有一套未添加细胞毒性剂或细胞毒性细胞的对照孔，导致只有最低可能（自发或背景）LDH释放。这些是
“自然释放井”。细胞毒性药物或细胞毒性药物处理的细胞细胞会释放出一个LDH，而LDH含量介于最大释放水平之间自发释放水平，这个水平将被计算为细胞毒性
1分析培养基
用于补充生长培养基的血清（胎牛血清等）含有LDH，可与LDH反应溶液反应并诱导背景颜色变化（A490）。即使没有细胞死亡。这个血清在培养基中的百分比越高，背景值越高信号将是。这个背景问题有两种解决方案：成长细胞在没有血清的情况下，或从所有细胞中减去背景信号在计算细胞毒性百分比之前。从生长中除去血清培养基会对整个细胞活力产生负面影响，所以这可能不会是所有单元格类型的选项。背景信号的减法比较容易。只需在分析中加入只含培养基的孔没有添加单元格。介质onl产生的LDH A490信号读取平板后，可从所有测试孔中减去对照
2靶细胞
不同类型的细胞含有不同量的乳酸脱氢酶。对于高在乳酸脱氢酶水平下，每个孔需要较少的细胞才能产生强大的A490与LDH水平相对较低的细胞相比。因此，我们建议进行初始滴定实验以确定最佳滴定数计划使用的目标电池的每孔电池数量。第13页的图3显示不同浓度HL-60细胞的滴定结果每口井，并用试剂盒中提供的Triton X-100进行处理，以产生每个细胞滴定的最大释放LDH值。对于HL-60，溶解每孔20万个细胞产生的A490值为-0。4，鉴于每孔10000个或更少的细胞释放乳酸脱氢酶是无法检测到的。因此，如果在细胞毒性试验中，每孔使用200.000个HL-60靶细胞可能检测到超过10000个细胞的裂解（5%或更多的细胞毒性），但是不可能检测到低于5%的细胞毒性。
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