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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Bacillus megaterium
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
Bacillus megaterium
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增巨大芽孢杆菌序列,与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 巨大芽孢杆菌PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 巨大芽孢杆菌PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是巨大芽孢杆菌PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 巨大芽孢杆菌PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(巨大芽孢杆菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验枯草芽孢杆菌,学名Bacillus subtilis,是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同,枯草芽孢杆菌没有外层膜,分泌的蛋白能直接释放到培养基中,是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统,它究竟强在哪些方面呢?且让AtaGenix为您一一道来。 1 安全可靠 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的,收录于FDA的GRAS菌中,欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品
也有发现。在动物组织中存在于线粒体、溶酶体中, Ca 可促进其作用,对热极为稳定,最适 pH偏碱性。猪胰脏里的磷脂酶已被提纯,一级结构也已确定。各种蛇毒中的磷脂酶也已被提纯,分子量为 8400到 3万左右,以各种同功酶存在。对于蛇毒磷脂酶 A2 来说,磷酯酰乙醇胺较卵磷酯难水解,它不能水解脑苷酯、神经磷脂。( 2)磷脂酶 A1 EC、 3. 1, 1. 32,见之于脑、肝脏、胰脏等动物组织,大肠杆菌、巨大芽孢杆菌等细菌中。在动物组织中,存在于细胞膜,溶酶体、微粒体里,在大肠杆菌中主要分布于细胞
、扩散等作用而进入细胞,细胞壁本身并未染色,因此,欲通过染色来观察细胞壁,必须设法使细胞壁能着色,而细胞质则不易着色,常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用,它们使细胞壁形成可着色的复合物,而使细胞质不易被着色,经结晶紫或甲基绿染色后,便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。 根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。 三、器材 巨大芽孢杆菌
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