小鼠肺癌细胞系带荧光素酶细胞系 LLC/LUC细胞

【求助】请问将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的

lsdcfhyj 请教前辈，将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的 chenjing198345 如果lab经费充裕的话可以用试剂盒包装慢病毒，然后感染真核细胞，完全按照protocol做就行，没啥特别的，sbi的kit不错。如果经费有限，一般是用磷酸钙转染法，这种方法在《分子克隆》里面有介绍，缓冲液的ph值很关键。 lsdcfhyj

双荧光素酶检测的原理和应用

待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒；2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等；3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，设置不同的检测时间点，一般为24h/48h；4、外界干预: 转染后，可进行物理/化学/病毒等的相应刺激；5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。三、荧光素酶报告基因的优点

【求助】请教大家一个关于报告基因质粒瞬时转染与报告基因表达的问题，问题比较长，谢谢

到染色体上，所以这种质粒的表达一般只能维持几天的时间，随后会丢失或降解掉。 不知道有没有回答到你的问题？ lsdcfhyj 哦，现在清楚了，我原来以为瞬时转染的质粒只能存在于细胞质中，如果它能进入细胞核，那么这就容易解释了，这几天一直纠结在这个问题上，谢谢您的回答了!看来您在这方面比较在行，我还想请教一个问题，就是在一种真核细胞中同时稳定转染两种报告基因质粒（双荧光素酶报告基因）建立稳定的细胞系的成功几率大吗，就我看的资料没人这样做，一般都是