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文献和实验科幻电影中将冻存若干年的生命体重新解冻复活的情节在生命科学研究过程中每一天都在上演。为了将每一种有生命的细胞较好的保存其原有的细胞特性或者长久的保存种质资源,实验人员往往将细胞用特殊配置的细胞冻存液保存于-196℃ 的液氮,使得细胞暂时脱离生长状态,等到实验需要的时候再从液氮中取出复苏应用。在这一看似神奇的生命存储过程中,我们不禁要问,这是如何实现的呢? 其实,细胞冻存和复苏的教科书和实验手册上面都有。小编不想再重复了。这里,我要谈谈应该注意的一些事项和技巧,大部分都是血泪教训
glacierna6 如果是做western blot,有个电转的过程,蛋白可以和NC膜比较牢固的结合。 但是如果我前面步骤都不做,直接点二抗到NC膜上呢,放置10分钟,能否牢固结合? 如果加封闭液,用摇床晃或者不晃,会不会把二抗从膜上晃下来(假设是没有饱和结合的)? 谢谢高人指点! shb-sangon 直接点二抗到NC膜上(膜下放置滤纸),放置10分钟,自然风干,能牢固结合。 用无蛋白封闭液
流式课堂 | 裂红 or 分离液?外周血不同制备方法应用场景
、粒细胞等),需要裂解红细胞;倘若检测的是红细胞,不需要裂解红细胞; ⊙ 如果后续样本不用于流式分析,而是需要培养或者冻存复苏,使用裂红后培养的细胞,活性可能会打折扣。 Ficoll 密度梯度离心法 01 原理 根据细胞的沉降系数差异,借助细胞分离液和离心操作,对细胞进行分离。 02 优点 ⊙ 获得的细胞更纯净,有利于细胞培养后检测胞内因子 ⊙ 可将细胞冻存后再复苏、培养、检测 ⊙ 去除死细胞 03 缺点 ⊙ 步骤复杂,需 30min 以上 ⊙ 取白膜层需要丰富的经验 ⊙ 只能获得淋巴细胞和单核
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