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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Pseudomonas mallei
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
Pseudomonas mallei
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鼻疽假单胞菌序列,与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 鼻疽假单胞菌PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 鼻疽假单胞菌PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是鼻疽假单胞菌PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 鼻疽假单胞菌PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(鼻疽假单胞菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验杆菌、产气荚膜梭菌、丙酸杆菌、念珠菌、分枝杆菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌伤寒及其他沙门菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、沙雷菌、铜绿假单胞菌、假单胞菌属、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、布氏杆菌、流感嗜血杆菌、胎儿弯曲菌、拟杆菌、梭杆菌 脑脊液 金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌A、B群链球菌、消化链球菌、炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、新型隐球菌、白色念珠菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他
属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属,以及所有抗菌药物治疗铜绿假单胞菌以及喹诺酮类治疗葡萄球菌最常出现上述情况。而金黄色葡萄球菌通常在延长疗程期间对万古霉素敏感菌株可发展为对万古霉素中介。”孙长贵说。 常规的药敏试验方法包括纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法和浓度梯度法(E-test),但每种方法都有优缺点和适用性。 “对于常见的需氧快速生长的一些细菌,纸片扩散法和测定MIC方法均适用;而对其他非肠杆菌科细菌,纸片扩散法则不适用,需测定MIC。”孙长贵说,进行药敏
Pseudomonas pseudoalcaligenes 假产碱假单胞菌 Pseudomonas putida 恶臭假单胞菌 Pseudomonas spp 假单胞菌属某些种 Pseudomonas sputita 恶臭假单胞菌 Pseudomonas stutzeri 施氏假单胞菌 Pseudomonsa aeruginosa 铜绿假单胞菌 Pseudomonsa fluorescens 荧光假单胞菌 Pseudomonsa pseudomallei 类鼻疽假单胞菌
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