上海大鼠肾纤维化模型构建

一、常用构建方法及操作步骤

1. 单侧输尿管梗阻（UUO）模型
   • 原理：通过结扎单侧输尿管导致尿液潴留、肾盂扩张，引发肾间质炎症和纤维化。
   • 操作步骤（整合）：
2. 术前准备：选择SPF级Wistar或SD大鼠（雄性，体重180-300g），术前禁食12小时，自由饮水。
3. 麻醉与消毒：腹腔注射水合氯醛（15%，350 mg/kg）或戊ba比妥钠麻醉，腹部剃毛后用碘伏消毒。
4. 手术操作：

• 于腹中线偏左3-4 mm处纵向切开皮肤及肌肉层，暴露左侧输尿管。
• 游离输尿管后，在肾下极附近进行双结扎（两结扎点间距约2-3 mm），中间剪断输尿管（传统方法）或仅结扎不切断（改良方法，减少并发症）。

1. 缝合与护理：逐层缝合肌层和皮肤，术后连续3天注射青霉素（20万单位/天）预防感染，置于加热垫恢复体温。

   • 实验周期：7-28天，纤维化程度随时间递增，术后14天即可观察到明显间质胶原沉积。

2. 5/6肾切除模型

   • 原理：通过分阶段切除大部分肾组织，模拟慢性肾功能衰竭的病理过程。
   • 操作步骤：

3. 第一阶段：切除左肾外缘及上下极约2/3组织（保留1/3功能肾单位）。

4. 第二阶段：1周后切除右肾，总切除量达5/6。

5. 术后管理：监测血压、蛋白尿，实验周期通常8-12周，逐渐出现肾小球硬化和间质纤维化。

   • 特点：更接近人类慢性肾病进展，但手术创伤大，死亡率较高。

6. 药物诱导模型

   • 庆大霉素（qingdameisu）诱导法：

• 腹腔注射庆大霉素（400 mg/kg/天，分两次），连续2天。
• 病理特征：肾小管上皮细胞坏死、基底膜增厚，7天后出现间质纤维化。
  • 其他药物：环孢素A、氯hua汞等也可通过肾毒性作用诱导纤维化。

1. 肾静脉结扎模型
   • 操作：结扎单侧肾静脉导致肾缺血，术后5-25天观察间质纤维化。
   • 特点：病变稳定且周期短，适合研究缺血性肾损伤。

二、模型评估指标及检测方法

1. 生理生化指标
   • 血清指标：

• Scr（血清肌酐） ：术后7-14天显著升高（2倍以上），21天后因对侧肾代偿可能下降，但仍高于基线。
• BUN（尿素氮） ：升高1-1.5倍，反映肾小球滤过功能下降。
  • 尿液检测：24小时尿蛋白定量（部分模型如5/6肾切除显著升高，UUO模型早期变化不明显）。

1. 组织病理学分析

   • HE染色：观察肾小管扩张、上皮细胞萎缩、炎性细胞浸润。
   • Masson染色：量化胶原纤维面积占比（纤维化指数），术后14天可达30%以上。
   • PAS染色：显示肾小管基底膜增厚及皱缩。

2. 分子标志物

   • TGF-β、α-SMA：纤维化相关蛋白表达上调，可通过免疫组化或Western blot检测