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3′ RACE或5′ RACE技术服务

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  • 北京
  • 2025年07月15日
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      3′ RACE或5′ RACE技术服务

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      北京宝盈同汇

    cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA endsRACE)是一种基于反转录PCR,从部分已知的cDNA序列扩增出其未知部分的5′端和3′端的cDNA序列的一种方法。RACE实验成功的关键在于完整的反转录产物及特异性佳的接头引物。作为一家从事生物技术产品的开发及销售的新型科技企业,本公司验发了国内第一款基于SMART原理的RACE试剂盒(SURPERSWITCH™ PCR cDNA合成试剂盒)。与Clontech的SMARTer™ PCR cDNA Synthesis Kit使用单一接头不同的是,本公司研发的SURPERSWITCH™ PCR cDNA合成试剂盒针对动物、植物和病毒等不同来源的生物材料设计了各自专用的接头引物,配合优化的反转录缓冲液及专用的稳定剂,在最大程度上保证了M-MLV反转录酶的末端转移酶活性,以有效地合成最完整的RACE产物。反转录步骤后合成的第一链cDNA可直接用于5'和3' RACE,无需再进行繁复的第二链cDNA合成和接头连接的过程。
    目前本公司已经分别为中国科学院、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位提供了RACE技术服务,涵盖包括家蚕、小熊蜂、鸡、鸽子、牛、羊、猪等动物材料,水稻、烟草、拟南芥、油菜、大蒜、百合、等植物材料,和动物及植物病毒等多种材料。

    服务流程
    1. 总RNA提取与质检;
    2. 已知序列的验证;
    3. 合成5'和3' RACE-ready cDNA第一链;通过LD-PCR分别进行5' 和3' RACE。
    4. 基因未知序列验证。

    试验周期
    6~8周内完成。如遇总RNA难以抽提的材料或基因表达量较低的样品会与客户协商约定样品试验时间。

    结果提交
    试验完成后公司应向客户提交如下试验结果数据:
    1. 试验中用到的所有重要设备的制造厂商、型号、操作参数,以及所有重要试剂的供应商等;
    2. 所有试验操作的步骤一份;
    3. 各部分的试验结果数据,包括:
    RACE试验的凝胶图片和测序报告(测序彩色波形图、序列碱基图);
    含未知末端片段的质粒及甘油菌。

    由于不同基因在不同组织中存在时空特异性表达,其基因全长序列也不会完全相同。公司提供的试验结果仅对客户提供样本负责,并提供试验图片佐证测序结果。此外,由于不同基因mRNA可能存在单核苷酸多态性位点或不同的剪接形式,针对这些类型产物的测序结果准确性由客户自行判断。

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    相关实验
    • 人种 race

      具有遗传上共同体质特征的人群,人们称这种人群为人种。人种之间有明显的区别。所谓人种与群体大小无关,大的群体有:白色人种、黄色人种等,象暇夷人、日本人,那样的小群体也可以称之为暇夷人种、日本人种。人种,大体上可看作相当于动物学上的变种或地方类型。所谓人,由于过去人种间的混血等复杂问题,要想严格地按动物特性或动物学的分类范畴加以阐述是困难的。作为区分人种标志的体质特征在全人类间有很大的变异,而应选择有强烈遗传倾向的体质特征,具有这种性质的体质特征彼称为人种特征。但实际上人种特征在各人

    • 5端RACE升级版

      实验概要 完成这个RACE需要全套反转录系统,当然选一个好的反转录酶(无RNase H),dUTP,taq酶,Uracil DNA glycosylase ,还有这几条引物: Adapter A AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN cDNA synthesis and adapter-A incorporation Adapter B  

    • 人APC和TSC-2 cDNA的长5'RACE

      MgCl2,dNTP每个200 µM,引物每个400 nM ]进行扩增,其中分别是AAP和引物TSC-2-2826(A带)或引物TSC-2-1732(B带)一起使用。 优化5RACE的TdT加尾条件 发现有几个因素影响cDNA 3末端加尾效率:1)RNA的存在抑制TdT;2)缓冲液成分和反应条件;3)TdT的数量和纯度;和4)cDNA 3末端的二级结构。 虽然TdT不能用RNA作为底物,但RNA的存在能够抑制酶活性,在添加0.01mg这么少的RNA,就能够导致加尾寡聚核苷酸数量较少和加上的核苷

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