HisDetector Western Blot Kit,

WB （western blot）-经验汇总

做了很久的 WB（western blot），走了很多弯路，其实发现 WB 想要做好并不难，总结了 WB 实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题 1：转膜不充分 (1) 膜没有完全均匀湿透 使用 100% methanol 浸透膜。 (2) 靶蛋白分子量小于 10 000 选择小孔径的膜，缩短转移

操作篇：western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定

升级Western blot可以同时检测大量蛋白

来自芝加哥大学癌症生物研究所，本-梅癌症研究中心等处的研究人员发明了一种能同时检测大量蛋白的新方法，彻底改变目前我们进行癌症和其它疾病蛋白表达水平检测的技术面貌，这种新方法效果与传统的Western Blotting一样好，但是时间可以大大缩短，比传统Western Blotting快48倍。这一研究成果公布在《Nature Methods》杂志上。这种称为“micro-western arrays”（微印迹分析）的方法能将蛋白检测常用实验：Western blot的特异识别能力，和DNA芯片