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- 2025年07月15日
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美迪西--蛋白质晶体结构测定
蛋白质晶体结构测定
> 结晶条件筛选
> 蛋白质共结晶及小分子浸泡
> 三维结构解析：Se-MAD法和分子置换
美迪西各种结晶体图：
美迪西结晶方法：
1、Multiple constructs into multiple vector
• N- and C- terminal truncation
• Protein mutation of surface residue
• Remove of flexiable regions
2、Expression & Purification of Protein
• Expression & solubility Test
(Co-expression with chapaton or ligand)
• Pilot purification and optimization
(AC, IEX, HIC, SEC ,co-purification with ligand,
buffer optimization)
• Scale-up production (10-50 mg)
• Protein concentration (2-20 mg/ml)
3、QC of target protein
• Mass spectroscopy
• SDS-PAGE
• HPLC (Size exclusion column behavior
4、Crystallization trays set-up
• Around published condition
(5 mg compound)
• Kits screen (10-20 mg)
5、Optimization
• pH and pricipitatant
• Additive screen
• Seeding
• Redesign constructs
6、Diffraction-quality crystal
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文献和实验X-射线衍射法是测定蛋白质晶体结构的极其重要方法。生物大分子X射线晶体学是揭示分子结构与功能的科学。目前还没有一种工具能够用它直接观察到蛋白质内部的原子和基团的排列。虽然电子显微镜接近于看到大分子的轮廓。但是仍然仅限于揭露分子的大小、形状、对称性和聚集状态等。通过X-射线衍射法（X-ray diffraction method）可间接地研究蛋白质晶体的空间结构。对晶体结构的研究将帮助人们从原子的水平上了解物质。 x射线是一种电磁波，能直线传播，使胶片感光
表示晶体的X射线结构分析精密度的值。X射线结构分析的结果，最终是在单位晶格内的几个断面上给出电子密度分布等高线图。譬如分辨率为2，就是说此图能勉强区别相距2的两点间电子密度的差异。小分子晶体结构测定，一般以0.8—1.0的分辨率进行，所以能够精密地确定各个原子的位置。而蛋白质晶体的结构测定往往只能达到2—6的分辨率。因为2分辨率对于相邻原子的间隔来说是稍具粗糙的，所以不能弄清详细的结构。但可区别并能判断苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸等氨基酸上环的存在，并可确定其位置等。结构测定的分辨率取决
子的三级结构和结构功能研究的结构生物学已经成为生命科学当前的前沿和带头学科。 结构生物学对生物大分子三级结构的测定以及结构运动研究是用什么手段呢？最主要是X- 射线晶体衍射方法- 蛋白质晶体学，其次是多维NMR核磁共振，第三是电镜晶体学和电镜三维重组。这三大手段每一个都能独立、完整地测定生物大分子在原子分辨水平的三维空间结构。但是其它的谱学，包括中子衍射, 都是非常重要的结构测定方法,不但辅助了结构和结构运动的研究，特别是运动的研究，动力学方面等等，所以其它谱学是一个不可忽略的结构测定手段
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