mRNA Cap 2氧甲基转移酶 GMP级

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
UCF·METM mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase GMP-grade UCF·METM mRNA Cap 2氧甲基转移酶GMP级	10612ES84	2000U	985
	10612ES92	10000U	4285
	10612ES97	50000U	18585

产品描述
mRNA Cap 2氧甲基转移酶（UCF.ME^TM mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA，从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。
本品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的Cap1加帽反应。

产品性质

英文名（English Name）	UCF.METM mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
来源（Source）	重组E.coli
宿主核酸残留（Host nucleic acid residue）	<10fg/U
宿主蛋白残留（Host protein residue）	<50ppm
病原体（HBV/ HCV/HIV）检测	无检出
内毒素残留（Endotoxin residue）	<0.05EU/1000U
支原体检测（Mycoplasma detection）	无检出
无菌检测（Sterility testing）	无检出
纯度（Purity）	≥95%（SDS-PAGE）
储存缓冲液（Storage Buffer）	20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1mM EDTA，1mM DTT，100mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100
活性单位定义（Unit Definition）	一单位（U）定义为：在37℃条件下1h内甲基化10pmol的80nt带帽RNA转录物所需的酶量。

运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。推荐分装冻存，避免反复冻融。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
		10612ES84	10612ES92	10612ES97
10612	mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50U/μL)	40μL	200μL	1mL

使用方法
1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16μL；
2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5min，反应后冰上放置 5min；
3、按下表（1）配置反应体系（适用于10μg以内Capped RNA的甲基化反应）；
4、37℃条件下孵育1h（对与目的片段长度小于200nt RNA，可将孵育时间增加到2h）；
5、10×Capping Buffer的配置如下：500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl₂、10mM DTT。
表1：20μL反应体系配置

体系组分	20μL（Total）
Denatured Capped RNA	16μL
10x Capping Reaction Buffer	2μL
SAM (4 mM)	1μL
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50U/μL)	1μL

注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子；
3、反应之前推荐65℃加热5min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5´端结构复杂，可将时间延长至10min；
4、SAM试剂在pH 7–8，37°C条件下稳定性较差，需要现用现配。可预先计算好所需SAM的用量，在反应前将32mM的储备液稀释成4mM的工作液。为防止SAM降解，工作液应保存于冰上。
HB210525