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- 2026年01月11日
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上海达为科生物科技有限公司
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裸鼠皮下成瘤动物实验
一、实验设计框架
1. 细胞选择与预处理
- 细胞类型：优先选择高侵袭性、成瘤性强的肿瘤细胞系（如Hep3B肝癌细胞、143B骨肉瘤细胞）。
- 细胞状态：需处于对数生长期（密度80-90%），活力>95%（台盼蓝染色验证）。
- 预处理：
- 转染或基因编辑（如CT57基因沉默）需在接种前72小时完成，确保稳定表达；
- 病毒感染细胞需在接种前传代扩增至足够数量。
2. 实验动物选择
| 参数 | 标准要求 | 优化建议 |
|---|---|---|
| 品系 | BALB/c-nu（胸腺缺陷型）、NOD-SCID（重度免疫缺陷） | 难成瘤细胞推荐使用NOG小鼠（NK细胞缺陷） |
| 周龄与性别 | 4-6周龄，雄性优先（激素稳定性高） | 雌鼠用于激素敏感性肿瘤（如乳腺癌）研究 |
| 健康状态 | SPF级饲养，无特定病原体，体重16-20g | 适应性饲养7天，环境温度22-25℃，湿度40-60% |
3. 接种方案设计
- 细胞浓度：1×10⁶~1×10⁷ cells/mL（常用5×10⁶ cells/0.1 mL PBS）；
- 基质胶比例：细胞悬液与Matrigel按1:1混合（提高成瘤率）；
- 接种部位：
- 腋下（血供丰富，便于观察）；
- 肩胛骨（适用于大体积肿瘤监测）；
- 避免腹股沟（活动干扰）及颈背部（麻醉风险）。
二、标准化操作流程
1. 细胞悬液制备
- 胰酶消化对数期细胞（0.25% Trypsin-EDTA，37℃ 2分钟）；
- PBS洗涤3次（去除血清抑制酶活性）；
- 重悬于预冷PBS或含基质胶的混合液（冰上操作防凝固）；
- 细胞计数调整浓度，确保30分钟内完成接种（避免活力下降）。
2. 动物准备与接种
- 麻醉：异氟烷吸入麻醉（浓度2-3%，诱导时间30秒）；
- 消毒：75%酒精擦拭接种部位（腋下或肩胛骨）；
- 注射技巧：
- 针头（27G）与皮肤呈15°刺入，推进1cm后注射；
- 缓慢推注（0.1 mL/10秒），退针前旋转90°减少漏液；
- 注射后轻压针孔，碘伏消毒防感染。
3. 术后管理
- 观察频率：第1周每日记录，后续每周3次；
- 肿瘤测量：游标卡尺测量长径（a）与短径（b），体积公式：V=0.5×a×b²；
- 终止标准：
- 肿瘤体积>2000 mm³或直径>20 mm；
- 出现溃疡、坏死或体重下降>20%。
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