裸鼠皮下成瘤动物实验

一、实验设计框架

1. 细胞选择与预处理

• 细胞类型：优先选择高侵袭性、成瘤性强的肿瘤细胞系（如Hep3B肝癌细胞、143B骨肉瘤细胞）。
• 细胞状态：需处于对数生长期（密度80-90%），活力>95%（台盼蓝染色验证）。
• 预处理：
  • 转染或基因编辑（如CT57基因沉默）需在接种前72小时完成，确保稳定表达；
  • 病毒感染细胞需在接种前传代扩增至足够数量。

2. 实验动物选择

参数	标准要求	优化建议
品系	BALB/c-nu（胸腺缺陷型）、NOD-SCID（重度免疫缺陷）	难成瘤细胞推荐使用NOG小鼠（NK细胞缺陷）
周龄与性别	4-6周龄，雄性优先（激素稳定性高）	雌鼠用于激素敏感性肿瘤（如乳腺癌）研究
健康状态	SPF级饲养，无特定病原体，体重16-20g	适应性饲养7天，环境温度22-25℃，湿度40-60%

3. 接种方案设计

• 细胞浓度：1×10⁶~1×10⁷ cells/mL（常用5×10⁶ cells/0.1 mL PBS）；
• 基质胶比例：细胞悬液与Matrigel按1:1混合（提高成瘤率）；
• 接种部位：
  • 腋下（血供丰富，便于观察）；
  • 肩胛骨（适用于大体积肿瘤监测）；
  • 避免腹股沟（活动干扰）及颈背部（麻醉风险）。

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二、标准化操作流程

1. 细胞悬液制备

1. 胰酶消化对数期细胞（0.25% Trypsin-EDTA，37℃ 2分钟）；
2. PBS洗涤3次（去除血清抑制酶活性）；
3. 重悬于预冷PBS或含基质胶的混合液（冰上操作防凝固）；
4. 细胞计数调整浓度，确保30分钟内完成接种（避免活力下降）。

2. 动物准备与接种

1. 麻醉：异氟烷吸入麻醉（浓度2-3%，诱导时间30秒）；
2. 消毒：75%酒精擦拭接种部位（腋下或肩胛骨）；
3. 注射技巧：
   • 针头（27G）与皮肤呈15°刺入，推进1cm后注射；
   • 缓慢推注（0.1 mL/10秒），退针前旋转90°减少漏液；
   • 注射后轻压针孔，碘伏消毒防感染。

3. 术后管理

• 观察频率：第1周每日记录，后续每周3次；
• 肿瘤测量：游标卡尺测量长径（a）与短径（b），体积公式：V=0.5×a×b²；
• 终止标准：
  • 肿瘤体积>2000 mm³或直径>20 mm；
  • 出现溃疡、坏死或体重下降>20%。