0.1/0.2ml平盖八联排管（含盖）透明/白色PCR管 八

非蛋白质氮的测定

4·2H2O溶解于100m1水中，加入0.5ml 2mol/LNaOH，加热至沸，并煮沸15min，冷却后补充无氨水100ml），4滴3%过氧化氢。放在电炉上蒸发，直至出现泡沫，然后降低温度以免泡沫溅到瓶颈上。继续用微火加热直至硫酸出现白色蒸汽。之后用球形玻璃塞塞上凯氏瓶口，增强火力，消化到溶液透明为止。冷却后向瓶中残留物加入10ml水。溶液转人50ml容量瓶中，用水冲洗残渣，并补加水到50ml，混匀。取25ml溶液放人烧杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液，冷却后，以2mol/LNaOH溶液

目的基因片段的PCR扩增与克隆

5ml管中， 迅速置于37℃摇床，150rpm，培养1小时。 8）取菌液50~100μl涂布在含氨苄青霉素、IPTG和X-Gal的LB平板上，37℃培养过夜，筛选转化子。注意要设空白，及质粒DNA对照。 （3）克隆片段的检测－1 1）在LB平板上挑取白色单菌落，置于2ml含氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃、200rpm振荡培养12-16小时； 2）4℃、12,000rpm离心30秒，收集细胞沉淀； 3）碱裂解法提取并纯化质粒DNA； ①将细菌沉淀，菌体重悬于100µl用冰

甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

3）由于该试剂盒中仅配备针筒没有针栓，如果有真空负压吸引器，使用起来很方便；如果没有，需要自备3ml-5ml注射器。将注射器针筒与试剂盒提供的回收小柱紧密连接后，将上述混合物用移液器移至针筒内，用2ml以上的EP管放置小柱下接收废液。加针栓，轻轻加压，将液体挤出，此时可见小柱内有白色的树脂沉积。 4）将注射器与小柱分离后拔出针栓，再将针筒与小柱连接，向针筒内加入2ml 80％的异丙醇，插入针栓，轻轻加压，将异丙醇挤出。此为洗涤步骤。 5）将注射器与小柱分离，将小柱置于洁净1.5ml洁净EP管上，离心