蛋白标准品（5mg/ml）

Western 实验步骤

液裂解细胞，用移液器适当吹打使细胞脱落，大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解，裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理：先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基，每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min，取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周，-20℃ 可保存约 2 个月，-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定：酶标板，酶标仪、离心机、1 mg/mL

紫外分光光度法测定蛋白质含量

分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250； 牛血清蛋白；超纯水。 1.2 试液的制备： 牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。 考马斯亮兰G250 试剂 称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。 2. 结果与讨论 2.1 校正曲线的绘制 准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准

蛋白定量Commassie法和BCA法比较

样品的蛋白浓度。 BCA法： 1.按50体积BCA试剂A加入1倍体积BCA试剂B配置适量BCA工作液，充分混匀。 2.将BSA冻干标准品（10mg/支）用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml，1000 ug/ml,500 ug/ml,250 ug/ml,125 ug/ml,62.5 ug/ml,31.25 ug/ml,15.625 ug/ml八个浓度的蛋白标准溶液。 3.M231用细胞总蛋白提取试剂提取总蛋白。 4.各取20ul蛋白标准品和待测M231