- ￥150
- 森贝伽
- 南京
- BI-WB005-200T
- 2026年01月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温+-20℃
- 保质期：
1年
- 供应商：
南京森贝伽
- 规格：
200T
整套试剂室温保存，一年有效。蛋白标准溶液室温保存，一个月有效；4℃保存，一年有效；-20℃ 可以长期保存。
【产品概述】
BCA 蛋白定量是最常用的蛋白浓度检测方法，其与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度。BCA 法测定蛋白浓度受其他成分影响小，对于 5%以内的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80 均具有很好的兼容性,但易受螯合剂、高浓度的还原剂等的影响。所以，在BCA 法测定蛋白浓度前应使蛋白溶液中的EDTA 浓度≤10 mM，DTT 浓度≤1mM，2-ME≤0.01%。
BCA Protein Assay Kit 在 50～1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系，其最小检出量为 25μ g/ml。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】
1、取适量的 5mg/ml 蛋白标准溶液，稀释至终浓度为 500μg/ml 或所需浓度。如取 100μl 5mg/ml 蛋白标准，加入 900μl 稀释液，充分混匀，即配制成 500μg/ml 蛋白标准溶液。
2、根据样品数量，按试剂(A):试剂(B)=50:1 的比例配制BCA 工作液，即取 50 份BCA 试剂A 和 1 份BCA 试剂B，充分混匀，即获得 BCA 工作液。例如取 5mlBCA 试剂A 和 0.1ml BCA 试剂B，配制成 5.1ml BCA 工作液，BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
3、将 500μg/ml 蛋白标准溶液按 0、1、2、4、8、12、16、20μl 加到 96 孔板或EP 管中，加稀释液补足至 20μl，其蛋白标准浓度依次为 0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。
4、加 20μl 待测蛋白到 96 孔板或EP 管中，如果样本不足 20μl，用稀释液补足至 20μl。注意： 如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液不同，应在待测蛋白中加入 20μl 稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋室温白样本孔中加入 20μl 稀释液，以减少不同溶液的差异。
5、各孔或管加入 200μl 配制好的BCA 工作液，37℃孵育 20～30min。
6、酶标仪或分光光度计测定 562nm 波长处吸光度(如无 562nm，540～595nm 之间的波长也可)，各孔或管吸光度减去用未加 500μg/ml 蛋白标准溶液的吸光度，以求得的差值为纵坐标，以标准孔或管中蛋白浓度(μg/ml)为横坐标，得出标准曲线及回归方程，根据标准曲线计算出待测样品的蛋白浓度。
【注意事项】
2、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有严重干扰BCA 法测定蛋白浓度的物质。
3、BCA法检测中样本中不应含有EDTA，否则影响检测结果。
4、因BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，建议每次测定时都做标准曲线，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则每次都做标准曲线。
5、如果没有酶标仪，也可以使用普通分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大 BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大；使用分光光度计测定蛋白浓度时，可以测定的样品数量可能会显著减少。
6、为了加快BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。
7、为保证蛋白的精确定量，样品的提取和标准蛋白的配制最好选用相同的缓冲液，同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值，建议使用其他的方法测定。
8、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验法是十分常用的蛋白质比色定量方法，很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质的固有的280nm吸收峰检测，BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性，消除了核酸的干扰，核酸干扰在对细胞裂解物或其他生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下，蛋白将Cu2+ 还原为Cu+ ，Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物，如图1，其吸光值与蛋白浓度成正比。测定在562nm 处的吸收值，并与标准
形成紫色络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 现对这两种方法进行比较： 一、实验材料： 细胞总蛋白提取试剂盒（AR0103） M231 BCA蛋白定量试剂盒（AR0146） Commassie改良增强型蛋白质定量试剂盒（AR0145） 二、操作步骤： Commassie法： 1.将BSA冻干标准品（10mg/支）用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml，1000 ug/ml,500
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
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