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- 2025年07月14日
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上海经科化学科技有限公司
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平板克隆形成实验
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平板克隆形成实验
一、实验简介
当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或者克隆。每个克隆含有50个以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。因此克隆形成率也反映细胞群体依赖性和增殖能力这两个重要形状。细胞克隆形成可以通过平板克隆形成及软琼脂克隆形成两种方式实现，前者适用于贴壁生长的细胞，后者适用于非锚定着依赖性生长的悬浮细胞，如骨髓造血干细胞、悬浮肿瘤细胞等。
二、平板克隆形实验步骤
1、细胞悬液制备：取对数生长期的单层培养细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，离心后用完全培养基重悬，制成细胞悬液。
2、细胞种板：将细胞悬液作梯度倍数稀释，以每皿50、100、200、500、1000、2000个细胞的梯度密度分别接种含1 mL 37 ℃预热培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37 ℃ 5% CO2的环境下，静置培养。
3、细胞观察：显微镜下观察到单个细胞长到20个以上细胞克隆，培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇1mL，固定15分钟。然后去固定液，加适量Giemsa应用染色液染10分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥，手记拍照采集图像。
4、克隆计数：用肉眼直接计数克隆数，最后计算克隆形成率。
三、结果分析
克隆形成率= 克隆数/接种细胞数×100%
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文献和实验vera21173 我研究的是一个基因对肿瘤细胞增殖的影响，上调这个基因的表达可以促进细胞增殖（CCK-8和平板集落形成实验的结果一致），下调这个基因的表达可以抑制细胞增殖。但有平板集落形成实验有一个奇怪的现象，稳转这个基因的细胞集落形成数量明显比空载细胞多，但集落大小比空载细胞小很多，镜下观察发现空载细胞形成的集落中的细胞很分散，而稳转目的基因的细胞集落中细胞很紧密。请问这能说明什么问题？ zhouyongchun_1
细胞集落形成实验 非整倍体无限细胞系和癌细胞株中，仍然存在不同细胞亚群，它们的功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。 目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力，集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验
，到细胞形成克隆时终止培养。 基本步骤： (1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。 (2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。 (3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加
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