YJ101 Protein A琼脂糖磁珠

Protein A琼脂糖磁珠
Protein A Magarose Beads
本产品4℃运输；保存于4℃，禁止产品冻结，长期存放请保证试剂管竖立向上，保质期24个月。

货号规格
goodYJ101     1 mL×2

产品简介
good琼脂糖磁珠(Magarose Beads)系列产品是医学与分子生物学研究中重要的载体工具，其粒径相对集中，表面布满丰富的羟基官能团，具有超顺磁性以及快速磁响应性等特点。
goodProtein A琼脂糖磁珠是由琼脂糖磁珠(Magarose Beads)与Protein A共价结合形成的复合微粒，其具有更高的抗体结合能力和较低的非特异蛋白吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。因其本身为微米级磁性微球，所以不需要离心操作，可大幅度缩短抗体吸附所需的时间。
good本产品适用于血浆、腹水以及组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。

产品参数

自备试剂

操作步骤
good◆ 样本处理
good◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ggA. 血清样品：若目标蛋白丰度较高，建议用 结合缓冲液 或1×PBS(货号：PS110)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100 µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)；
good◆ggB. 悬浮细胞：离心收集细胞 (4℃，500×g，10 min)，弃上清后称重，按每毫克细胞 50 µL 的比例用 1×PBS( 货号：PS110) 洗涤 2 次；按每毫克细胞 5~10 µL 的比例加入 结合缓冲液 ，同时加入蛋白酶抑制剂 ( 货号：GRF101)，混匀后置于冰上孵育 10 min；离心收集上清液 (4℃，14,000×g，10 min)，置于冰上备用 ( 或置于 -20℃长期保存 )；
good◆ggC. 贴壁细胞： 移去培养基，按每 1.0×105 个细胞 150 µL 的比例用 1×PBS( 货号：PS110) 洗涤两次；用细胞刮刀刮落细胞，收集至 1.5 mL 离心管内，按每 1.0×105 个细胞 20~30 µL 的比例加入 结合缓冲液 ，同时加入蛋白酶抑制剂 ( 货号：GRF101)，混匀后置于冰上孵育 10min；离心收集上清液 (4℃，14,000×g，10 min)，置于冰上备用 ( 或置于 -20℃长期保存 )；
good◆ggD. 大肠杆菌：离心收集大肠杆菌 (4℃，12,000×g，2 min)，弃上清后称重，按每克菌体 ( 湿重 )10 mL的比例用 1×PBS( 货号：PS110) 洗涤 2 次；按每克菌体 ( 湿重 )5~10 mL 的比例加入结合缓冲液 ，同时加入蛋白酶抑制剂 ( 货号：GRF101)，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清 (4℃，12,000×g，10 min)。
good◆ggE. 组织样品： 建议使用 免疫 ( 共 ) 沉淀裂解液 ( 货号：PC105) 进行裂解，具体操作如下：
good◆ggE. 组织样品： (1) 把组织剪切成细小的碎片；
good◆ggE. 组织样品： (2) 按照每 20 mg 组织样本 150~250 μL 的比例加入裂解液；
good◆ggE. 组织样品： (2) 注意：如果样本裂解不充分，可以适当提高裂解液的用量；若需要高浓度的蛋白样品，也可适当降低裂解液的用量。
good◆ggE. 组织样品： (3) 用玻璃匀浆器匀浆，直至样本充分裂解；
good◆ggE. 组织样品： (2) 注意：若组织样本非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液，通过强烈涡旋振荡使其裂解充分。
good◆ggE. 组织样品： (4) 充分裂解后，10,000~14,000×g 离心 3~5 min，小心地将上清液 ( 蛋白样品 ) 移入新的离心管中，即可进行后续步骤。

good◆ 磁珠预处理
good◆gg2. 用移液器轻柔吹打 Protein A 琼脂糖磁珠 ，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于 1.5 mL离心管中；
good◆gg3. 加入 500 µL 结合缓冲液 或 1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清；
good◆gg4. 重复步骤3两次；

good◆ 抗体与磁珠结合
good◆gg5. 稀释：用 结合缓冲液 或 1×PBS 稀释抗体样品至终浓度为 5~50 µg/mL，置于冰上备用 ；
good◆gg6. 结合：将 500 µL 上步稀释好的抗体加入预处理后的磁珠中，置于翻转混合仪上孵育 ( 常温 2 h，4℃ 4~6 h 或过夜 )，接着在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，把上清液转移到新的离心管中备用 ( 上清液可用于检测抗体是否存在残留 )，离心管中剩余的即为 抗体 - 磁珠复合物 ；
good◆gg6. 注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
good◆gg7. 洗涤：在上一步得到的 抗体 - 磁珠复合物 中加入 500 µL 结合缓冲液 或 1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清。再重复此步骤两次；

good◆ 抗原与抗体-磁珠复合物结合
good◆gg8. 结合：向洗涤后的 抗体-磁珠复合物 中加入500 µL步骤1制备好的样品，置于翻转混合仪上孵育(常温 2 h，4℃ 4~6 h 或过夜 )，接着在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清，离心管中剩余的即为 抗原 - 抗体 - 磁珠复合物；
good◆gg9. 洗涤：在上一步得到的 抗原 - 抗体 - 磁珠复合物 中加入 1 mL 洗涤缓冲液 或 1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清。再重复此步骤三次；
good◆g10. 洗脱：本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。 
good◆g10. 洗脱：变 性 洗 脱： 此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。向步骤 9 洗涤后的 抗原 - 抗体 -磁珠复合物 中加入 60 µL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液 ( 货号：LT101) 混合均匀，100℃加热 10 min。待冷却后，将离心管在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，收集上清，进行 SDS-PAGE 检测。
good◆g10. 洗脱：非变性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向步骤 9 洗涤后的 抗原 - 抗体 - 磁珠复合物 中加入 25~50 µL 洗脱缓冲液，室温孵育 10 min；将离心管在磁力架上静置 1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，收集上清液至新的离心管，并立即加入 1 µL 中和缓冲液 将洗脱产物 pH 调节至中性，用于后期功能分析。

注意事项
good1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good2. 本产品仅限科研使用。