FITC标记驴抗兔IgG二抗

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： （1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物； （2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物； （3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti

间接放射免疫法检测待测样品mTNF

抗TNF的抗血清（4）二抗：125I标记的驴抗兔IgG（5）未免疫兔血清（6）制备好的巨噬细胞悬液（细胞浓度为1×106ml）（7）96孔PVC板（聚本乙稀板）（8）γ-计数仪，温浴箱，刻度吸管，毛细吸管，加样器（头）三、操作步骤（1）将准备好的巨噬细胞悬液加入PVC板各孔中，0.1ml/孔，再用1%多聚甲醛固定于PVC板中，然后用PBS洗去多余的多聚甲醛；（2）设立不同倍比稀释度的TNF标准品；（3）加入3%BSA-PBS，每孔0.1ml， 37℃孵育1h，以封闭抗体非特异性结合位点；（3）加入3%BSA