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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
详见说明书
- 库存:
100
- 供应商:
上海抚生
- 规格:
50次
本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针,通过实时荧光一步法RT-PCR(Taqman探针法)对鸭源性成分核酸进行定性检测。
优越的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板,扩增β-actin基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强,扩增效率更高。
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
犬白介素11(IL-11)免疫试剂盒 phospho-ECT2 (Thr373) 磷酸化上皮细胞癌转化蛋白2抗体
犬白介素10(IL-10)免疫试剂盒 phospho-EIF4G1 (Ser1238) 磷酸化真核翻译起始因子4G抗体
犬白介素1(IL-1)免疫试剂盒 EGFR5 表皮生长因子受体5抗体
犬癌胚抗原(CEA)免疫试剂盒 ETFB 电子转移黄素蛋白β肽/黄素蛋白抗体
犬γ干扰素(IFN-γ)免疫试剂盒 Alpha-ENaC 钠通道蛋白α ENaC
犬γ氨基丁酸(GABA)免疫试剂盒 E2F8 转录因子E2F8抗体
犬β内啡肽(β-EP)免疫试剂盒 EMAP2 内皮单核细胞激活肽2抗体
犬β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫试剂盒 Ecm2 细胞外基质蛋白2抗体
犬α-3干扰素(IFN-α3)免疫试剂盒 EMP3 上皮细胞膜蛋白3抗体
犬α1微球蛋白(α1-MG)免疫试剂盒 EVC2 膜蛋白EVC2抗体
犬α-1/2干扰素(IFN-α1/2)免疫试剂盒 EPDR1 哺乳动物室管膜相关蛋白1抗体
犬S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)免疫试剂盒 ESAM 内皮细胞粘附分子抗体
犬S100B蛋白(S100B)免疫试剂盒 Epigen 上皮细胞有丝分裂蛋白抗体
犬P选择素(SELP)免疫试剂盒 Emerin Emerin蛋白抗体
犬P物质受体(TACR1)免疫试剂盒 ERK5 细胞外信号调节激酶5抗体
犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)免疫试剂盒 ENPP5 磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员5抗体
犬N端前心钠肽(NT-ProANP)免疫试剂盒 EGR2 早期生长反应蛋白2抗体
犬N端前脑钠素(NT-proBNP)免疫试剂盒 phospho-Estrogen Receptor beta (ser105) 磷酸化雌激素受体β抗体
犬KI-67抗原(MKI67)免疫试剂盒 CHKL 激酶β抗体
犬I 型胶原蛋白免疫试剂盒 EB2 微管相关末端结合蛋白2抗体
犬E选择素(SELE)免疫试剂盒 EME1 减数分操作程序:
由您提供该实验中目的基因的相关资料(如:基因名称、序列等信息),我们共同探讨服务的可能性和技术路线;
商定服务收费、付款方式、服务期限等,并签定技术服务合同。
有您提供实验所需的足够量的实验样本(100mg组织或107个细胞),本公司不接受您提供的RNA样本 PCR所需引物/探针(如果用探针法),可以由您自己提供,也可以委托本公司设计合成(费用转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒另计)。如果由您自己提供,必须是PAGE纯化的高质量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探针。
我们进行RNA抽提、RNA定量、反转录、Real-time PCR扩增、数据分析。
提供实验报告,包括实验过程、所用仪器试剂、扩增曲线、标准曲线和相关分析数据等。
PCR检测方法包括以下步骤:
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。 步骤(2)为:待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
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文献和实验源序列,这些序列通常不存在于野生型植物中。其中,这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来,则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测,逐渐成为科学家们关注的焦点。目前,已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列,选择退火位点生成单一DNA片段,以便于结果的分析。PCR反应
子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(NPTII)基因。普通PCR检测结果表明,3种花卉6个样品中仅矮牵牛的1个样品含有这3种转基因成分,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的2个或3个转基因成分,得到预期结果。 关键词: 多重PCR;35S启动子;NOS终止子;NPTII基因 中图分类号: S727-31;Q78 文献标识
年我国要求对转基因农作物实行标签管理。抗草甘膦(glyphosate)大豆(商品名,roundup ready soybean)是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。它是目前使用最广的转基因作物之一,每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。因此,研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。目前采用PCR检测转基因大豆的方法大多是采用琼脂 糖凝胶电泳法,首先检测CAMV-35S启动子和NOS终止子进行筛选
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