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- 上海谷研
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- GOY-P13106
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海谷研
- 检测范围：
3.125mU/ml100mU/ml
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
0.1
- 适应物种：
详见说明书
- 标记物：
详见说明书
- 样本：
asparagine synthetase
- 规格：
48T/96T
仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材:
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算:
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
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文献和实验酸，天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸及谷氨酰胺由丙酮酸、草酰乙酸和α－酮戊二酸合，三种α-酮酸：丙酮酸、草酰乙酸和α-酮戊二酸分别为丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸的前体，经一步转氨反应可生成相应氨基酸(图7－22、反应1-3)。天冬酰胺和谷氨酰胺分别由天冬氨酸和谷胺酸加氨反应生成(图7-22反应4，5)。谷氨酰胺合成酶(glutamine cynthetase)催化谷氨酰胺合成，NH3为氨基供体、反应中消耗ATP生成ADP和Pi。而天冬酰胺由天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase)催化
长度可达 20kb，适合于各种 GC 含量的扩增，可用于多种样本的直接 PCR 如植物叶片、全血等。且扩增仅需 30s/kb，甚至于 2kb/s。如此卓越，爱不释手了吧？ 4. 选择直接扩增试剂盒对粗品扩增 vazyme 生产的各种直扩试剂盒，直接对粗品进行扩增，大大减少了实验的工作周期。如小鼠基因型鉴定可以直接使用 One Step Mouse Genotyping Kit，全血扩增可以直接使用 Blood Direct PCR Kit V2。
中含有丰富的收缩蛋白和结缔组织，以及干扰 RNA 分离的胶原蛋白。 解决方案 1. 对于含有丰富的收缩蛋白和结缔组织，组织细胞密度低，其中 RNA 含量较少，可以适当增加材料的起始用量。 2. 务必要在低温冷冻条件下将组织彻底磨碎，并尽量尽快研磨成粉末状。 3. 用蛋白酶或含有苯酚的试剂处理样本。 内源性 RNase 含量高的组织如肾脏、肠、脾脏、胸腺以及胰腺 该类样本中 RNase 含量很高，提取过程中很容易发生 RNA 的降解。 解决方案 1. 尽量使用新鲜组织，采样不宜太大，尽可能缩短
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