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- 详细信息
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36
- 英文名：
Hochst33342/PI Double Staining Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
100次
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒
英文名称 Hochst33342/PI Double Staining Kit
规格: 100次
分类 PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下是Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒的相关产品：
17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione 中文名：醋酸环丙氯地孕酮 分子式：C24H30Cl2O4 神经胶质细胞衍化营养因子 (GDNF) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装
16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone 中文名： 分子式：C24H32O7 生长分化因子 -3(GDF-3) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装
15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid 中文名： 分子式：C18H32O4 心肌营养素1 英文名称： Cardioophin-1 规格： 48T/96T 英文缩写： CT-1
14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide 中文名： 分子式：C30H44O10 半胱天冬蛋白酶-1 英文名称： cysteine-aspaic acid protease-1 规格： 48T/96T 英文缩写： Caspase-1
12-Hydroxyjasmonic acid 中文名：12-羟基酸 分子式：C12H18O4 半胱天冬蛋白酶-2 英文名称： cysteine-aspaic acid protease-2 规格： 48T/96T 英文缩写： Caspase-2
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin） 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Lafutidine 11
8288-08-7
中文名：拉呋替丁 分子式：C22H29N3O4S 度：98.0% 关键词：
小鼠E选择素elisa试剂盒 小鼠E选择素试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠E选择素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠E选择素试剂盒、小鼠E选择素eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Bezafibrate 41859-67-0 中文名：苯扎贝特 分子式：C19H20ClNO4
小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Benzoyl-DL-mine 中文名：苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式：C12H15NO3S 度：98.0%
小鼠E钙粘着蛋白elisa试剂盒 小鼠E钙粘着蛋白试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠E钙粘着蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠E钙粘着蛋白试剂盒、小鼠E钙粘着蛋白eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Betaxolol 中文名：盐酸倍他洛尔 分子式：C18H30ClNO3 度：98.0%
小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Benzoyl-DL-mine 中文名：苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式：C12H15NO3S
柠檬酸（CA）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名：苯甲酸利扎曲坦 分子式：C22H25N5O2
镍快速测试盒 Nickel rapid test case Ranitidine 66357-35-5 中文名：雷尼替丁 分子式：C13H22N4O3S 度：98.0% 关键词：
镍测试盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名： 分子式：C16H16N4O3 度：98.0%
尿酸含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Tropisetron 105826-92-4 中文名：盐酸托烷司琼 分子式：C17H21ClN2O2
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名：O-苄基-L-酪氨酸 分子式：C16H17NO3
Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒Otophylloside O 132
6583-08-7
中文名： 分子式：C56H84O20 兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside 180
8159-02-5
中文名： 分子式：C56H84O20 Human cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 人心肌转录因子GATA4 ELISA试剂盒
Otophylloside F 250217-73-3 中文名：青阳参苷F 分子式：C48H76O16 Humanai-Ku-aibodyELISAKit 人抗Ku抗体(ai-Ku-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside 171422-85-8 中文名： 分子式：C56H90O19 HumanElastaseELISA试剂盒人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 168001-54-5 中文名： 分子式：C56H90O19 组织PDK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒
英文名称 Hochst33342/PI Double Staining Kit
规格: 100次
分类 PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下是Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒的相关产品：
17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione 中文名：醋酸环丙氯地孕酮 分子式：C24H30Cl2O4 神经胶质细胞衍化营养因子 (GDNF) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装
16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone 中文名： 分子式：C24H32O7 生长分化因子 -3(GDF-3) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装
15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid 中文名： 分子式：C18H32O4 心肌营养素1 英文名称： Cardioophin-1 规格： 48T/96T 英文缩写： CT-1
14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide 中文名： 分子式：C30H44O10 半胱天冬蛋白酶-1 英文名称： cysteine-aspaic acid protease-1 规格： 48T/96T 英文缩写： Caspase-1
12-Hydroxyjasmonic acid 中文名：12-羟基酸 分子式：C12H18O4 半胱天冬蛋白酶-2 英文名称： cysteine-aspaic acid protease-2 规格： 48T/96T 英文缩写： Caspase-2
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin） 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Lafutidine 11
小鼠E选择素elisa试剂盒 小鼠E选择素试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠E选择素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠E选择素试剂盒、小鼠E选择素eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Bezafibrate 41859-67-0 中文名：苯扎贝特 分子式：C19H20ClNO4
小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Benzoyl-DL-mine 中文名：苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式：C12H15NO3S 度：98.0%
小鼠E钙粘着蛋白elisa试剂盒 小鼠E钙粘着蛋白试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠E钙粘着蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠E钙粘着蛋白试剂盒、小鼠E钙粘着蛋白eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Betaxolol 中文名：盐酸倍他洛尔 分子式：C18H30ClNO3 度：98.0%
小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Benzoyl-DL-mine 中文名：苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式：C12H15NO3S
柠檬酸（CA）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名：苯甲酸利扎曲坦 分子式：C22H25N5O2
镍快速测试盒 Nickel rapid test case Ranitidine 66357-35-5 中文名：雷尼替丁 分子式：C13H22N4O3S 度：98.0% 关键词：
镍测试盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名： 分子式：C16H16N4O3 度：98.0%
尿酸含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Tropisetron 105826-92-4 中文名：盐酸托烷司琼 分子式：C17H21ClN2O2
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名：O-苄基-L-酪氨酸 分子式：C16H17NO3
Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒Otophylloside O 132
Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside 180
Otophylloside F 250217-73-3 中文名：青阳参苷F 分子式：C48H76O16 Humanai-Ku-aibodyELISAKit 人抗Ku抗体(ai-Ku-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside 171422-85-8 中文名： 分子式：C56H90O19 HumanElastaseELISA试剂盒人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 168001-54-5 中文名： 分子式：C56H90O19 组织PDK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
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文献和实验相关实验
韶光逐浅 我想问一下Hoechst凋亡染色试剂盒国产的哪个公司的好啊？ yunitongxing 原装进口试剂 韶光逐浅 好的，多谢啦 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
发现Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。Hochest/PI双染 astra: 请问用hoechst33258可以和PI进行双染可以么？查了很多实验手册，都是单染，由于没有经验，所以能不能麻烦你提供双染的实验流程？ midas: 当然可以。以下步骤供参考： 1、向细胞中加入用0.01MPBS溶解的Hoechst33342，终浓度为10μg/ml，37℃反应10min； 2、继续加入用0.01MPBS溶解的PI，使它的终浓度为10μg/ml，4℃反应20min； 3、直接
Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。 5. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。 6. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。 7. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 二、悬浮细胞 1. 离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内，加入0.5 ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 2. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次
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Hoechst 33342/PI细胞双染试剂盒
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