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Mouse肝原位瘤
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晶莱生物
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实验材料
1、实验动物
清洁级BALB/c近交系小鼠,6-8周龄,雄性,体重为18-20g,购于北京维通利华实验技术有限公司;饲养环境:清洁无尘,空气新鲜,温度17-23度,相对湿度50-65%,噪音85分贝以下;饲养方法:每周更换3次垫料,添加4次饲料,确保垫料清洁干燥,饲料充足新鲜。适应牲喂养1周后进入实验状态。
2、实验细胞株
小鼠H22肝癌细胞株
实验方法
1、H22肝癌细胞复苏及培养:将装有腹水型H22肝癌细胞株的冻存管从-80℃冰箱取出,并迅速放入盛有37℃纯水的恒温水浴箱中,保持摇动。融化后,在无菌条件下打开冻存管,吸出细胞悬液,移入离心管中,加入含15%胎牛血清的DMEM细胞培养液至10ml,1000rpm离心5min,弃上清液,加入新培养液,吹打,重新悬浮细胞,移入培养瓶中,在CO2培养箱(37℃,5%CO2)中培养。复苏细胞培养12h后,镜下观察细胞生长情况,细胞呈聚团状,然后进行细胞传代换液。H22肝癌细胞株是腹水型细胞株,悬浮生长,待细胞计数达1×107个/ml浓度时,且细胞处于对数生长期时方可进行实验操作。
2、小鼠肝癌细胞原位移植瘤模型原位组小鼠用5%水合氯醛0.06ml/10g麻醉,平卧位固定于鼠板上,用胶带固定鼠的四肢,手术前用脱毛膏进行脱毛,以便清楚的观察手术位置。将脱毛膏擦洗干净,用碘伏消毒后在左腹腔做一长约1cm横断面小切口。用生理盐水润湿过的棉签将肝左叶轻轻拉出,使其充分暴露。用25微升的微量注射器取适量细胞悬液10微升(1.5*106/ml)缓慢注射入肝左叶中,注射结束后,在肝左叶中停留约1-2min后将注射器拔出。注射成功后,用棉签按压止血约1-2min后,将肝脏放回体内原位,逐层缝合切口,涂抹抗生素,置于保暖箱中及注意防止感染,约30min后小鼠苏醒。
实验结果
造模后约3周左右可在肝脏位置触摸到肿瘤,处死并解剖发现肝脏均长出肿瘤。实验期间,约15天左右有部分小鼠出现腹水情况,疑造模时细胞漏出至腹腔中导致腹水现象。
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