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具化学抗性的PVDF 膜用于蛋白研究,用于Edman 降解(N-端)测序。由于 PVDF 膜有很高的结合能力,而且在多次转移和标记后仍能避免撕裂和脆裂,长期以来它一直作为western 印迹杂交膜。Bio-Rad 为用户提供了独创的蛋白测序和转印PVDF 膜。所有Bio-Rad PVDF 膜的孔径均为0.2 µm 。
Immun-Blot PVDF 膜能强有力地保留靶蛋白,并减少影响高敏感度检测的非特异性蛋白结合,使它成为化学发 光和比色 Western 杂交的理想选择。载量为150�160 µg/cm2 。
Sequi-Blot PVDF 膜具有突出的蛋白测序能力,它具有的结合载量甚至可测序低丰度蛋白。Sequi-Blot PVDF 膜 能保留所有转移的蛋白,而其它品牌的PVDF 膜会使大量蛋白从膜上损失。载量为170�200 µg/cm2 。
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文献和实验(20X) EnhanceIT Polymer solution (10X) TEMED Ammonium Persulfate 12% 50-150 3.00 ml 5.5 ml 0.50 ml 1.00 ml 5 µl 50 µl 11% 60-200 2.75 ml 5.75 ml 0.50 ml 1.00 ml 5 µl 50 µl 10% 70-250 2.50 ml 6.00 ml 0.50 ml 1.00 ml 5 µl 50 µl
。常用的膜一般是由乙酸纤维或硝酸纤维或此二者的混合物制成。近年来为适应制药和食品工业上灭菌的需要,发展了非纤维型的各向异性膜,例如聚砜膜、聚砜酰胺膜和聚丙烯腈膜等。这种膜在pH1~14都是稳定的,且能在90℃下正常工作。超滤膜通常是比较稳定的,若使用恰当,能连续用1~2年。暂时不用,可浸在1%甲醛溶液或0.2%叠氮化钠NaN3中保存。不同材质及截留分子量(MWCO)的超滤膜性能比较超滤膜相对流速(ml/min/cm2)性能特点聚醚砜,pH范围1~14 3,000 MWCO0.05肽的回收
Stringency Wash Solution#1 (100 cm2膜面积加入20 ml洗膜溶液),室温下,摇动洗膜5min两次。 5.12.2 高严紧性洗膜: 加入High Stringency Wash Solution#2 (100 cm2膜面积加入20 ml洗膜溶液),42℃ 摇动洗膜20 min两次。 5.13 曝光: 5.13.1 将膜从洗膜液中取出,用保鲜膜包住,以防止膜干燥。 5.13.2 检查膜上放射性强度,估计曝光时间 5.13
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