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- 2025年12月10日
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具化学抗性的PVDF 膜用于蛋白研究，用于Edman 降解（N-端）测序。由于 PVDF 膜有很高的结合能力，而且在多次转移和标记后仍能避免撕裂和脆裂，长期以来它一直作为western 印迹杂交膜。Bio-Rad 为用户提供了独创的蛋白测序和转印PVDF 膜。所有Bio-Rad PVDF 膜的孔径均为0.2 µm 。
Immun-Blot PVDF 膜能强有力地保留靶蛋白，并减少影响高敏感度检测的非特异性蛋白结合，使它成为化学发 光和比色 Western 杂交的理想选择。载量为150�160 µg/cm2 。
Sequi-Blot PVDF 膜具有突出的蛋白测序能力，它具有的结合载量甚至可测序低丰度蛋白。Sequi-Blot PVDF 膜 能保留所有转移的蛋白，而其它品牌的PVDF 膜会使大量蛋白从膜上损失。载量为170�200 µg/cm2 。
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文献和实验, deionized, 50% 25ml 20×SSC 12.5ml 1M sodium phosphate, pH 7.0 2.5ml N-lauroylsarcosine, 0.1% (w/v) 0.5ml blocking reagent, 2% 1g 12.1000ml 0． 01N的NaOH 0.4g 3M的NaCl 175.32g 13. 20×SSC (500ml) DEPC处理 3M NaCl 87.66g 0.3M sodium citrate 44
信号减弱。 检测膜蛋白一般不建议使用甲醇或丙酮固定，有机溶剂能够破坏膜结构。 4. 透化方法不当 检查靶标蛋白表达位置，胞内蛋白需要透化处理。 膜蛋白需要考虑所检测靶表位位于膜内还是膜外，膜外则不需要透化。 5. 二抗选择不当 二抗选择建议如下： 6. 信号放大不够 如果检测靶点是低丰度蛋白．信号弱可能是由于信号放大不足导致的，可以使用Invitrogen SuperBoost 酪胺信号放大技术，进一步增强信号，实现低丰度，难以检测蛋白的检测
吐血推荐本人实战经验：解决ECL 半定量western blot中的高背景和非特异性带问题
2-ME (liquid, 14.3M) 2% SDS 62.5mM Tris-HCl pH 6.7 40ml 2-ME 0.28ml 20% SDS 4ml 1M Tris-HCl pH 6.7 2.5ml H2O 33.22ml Protocol: a. submerge the membrane in stripping buffer, 50-60 degree for 30 min。 b. wash the membrane for 2×10 min
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