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鹿森生物
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文献和实验) 2.1.提前24h铺24孔板(先放置细胞爬片),将细胞悬液浓度调整为适当浓度,每孔加入300 μL 细胞悬液,约2×104个细胞 2.2.避光操作:用无血清培养基将染色样本EVs浓度调整为适当浓度 2.3.吸除待处理细胞原有的培养基,用PBS清洗两次 2.4.避光操作:加入300 μL含染色EVs的新鲜培养基,染色EVs的粒子数约为1×1010个/孔,在细胞培养箱避光孵育 24 h 3.细胞染色 3.1. DIO细胞膜染色 l孵育 24 小时后,弃去孵育液,用 PBS 清洗细胞
溶解后跑电泳,跑出条带了,但是是上面和下面各一条清晰的条带,中间有一团像是很多条带一样不清晰的,按道理应该是提出RNA了的,因为看到了直径约1mm的白色膜状沉淀,说明还是可以提出RNA,但是另一个问题是我实验时因为干预因素较贵,不能用这么多细胞,只能用10*6个细胞800ul培养基在24孔板培养,所以不知道这么少的细胞提RNA能行不,有人跟我说这么少的细胞只用加10ul的Trizol,加多了会稀释,因为血标本来之不易,我没敢试,想问问这么少的Trizol可以吗,谢谢! xia1015q
保存。 13、如何鉴定提取的外泌体? 通常会用到:透射电镜检测(形态)、NTA 粒径检测(大小)、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时,常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解? 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂,或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
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