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YXSW
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浙江羽翔生物科技有限公司
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100ml
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
抗原修复方法 Antigen Retrieval Methods
技术即可检测到特定抗原。 恢复表位免疫反应性的方法有很多种。即使是改变抗体稀释液的pH值或阳离子浓度这样简单的方法,也能影响抗体与其表位的亲和力。对于部分掩蔽的表位,在进行抗原修复之前,可以先尝试延长一抗的孵育时间。然而,这一步骤也需要进一步优化,包括合适的抗体浓度、孵育时间和温度。在讨论抗原修复方法时,通常将其分为两大类:蛋白酶诱导表位修复(PIER)和热诱导表位修复(HIER)。一旦优化,抗原修复的效果将非常显著。 蛋白酶诱导表位修复(PIER) 在PIER方法中,蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶
不完全:使用正常山羊血清或 1%~5% BSA 封闭 1h。 (5)离子相互作用造成的背景:降低抗体稀释液的离子强度。 (6)切片或细胞过于干燥或孵育温度过高:实验过程中请保持切片处于湿润状态,一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 (7)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (8)样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久:样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4:为什么会出现非特异性染色,如何避免? (1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色:由于本试剂盒使用
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