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文献和实验灌注固定主要用于神经系统,其他组织意义不是很大,而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好! 一、小鼠灌注 灌流固定小鼠时我一般采用输液器的针头(4 号半,这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白,针头要从心轴方向进针,刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了,开始灌流后剪破右心耳,约 40 毫升生理盐水,后再灌流约 20 毫升多聚甲醛,整个灌流固定的过程就完成了。 二、大鼠灌注 按大鼠体重,用 2% 戊巴比妥钠(0.25ml/100g)进行腹腔注射麻醉,开胸暴露心脏,向左心室内注射
钠,5mmol/L DETA(pH8.0)4)甲醛, 甲酰胺3 仪器: 电泳装置,紫外透射观测仪二、实验程序1 甲醛变性的琼脂糖(Agarose) 凝胶的配制在250mL的锥形瓶中准确称量2g Agarose (Sigama),再加20mL 10×TAE Buffer,144mLDEPC处理过的双蒸水,微波炉中化胶,待冷却至50-60℃加EB至终浓度≤0.5μg/mL。在通风橱中加入36 mL甲醛,放置一段时间以减少甲醛蒸汽。2 RNA的甲醛变性电泳1) 样品制备,RNA总量10μg,5×甲醛凝胶
免疫荧光(immunofluorescence)是一种常用的光学显微术,即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合,然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置,以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。 免疫荧光实验流程 1. 固定 固定液种类:有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮等);交联剂(4%PFA、10%中性福尔马林),固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。但针对磷酸化的抗体,不适合用甲醛,会导致磷酸
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