clontech特约代理商|632640 重组Cas9蛋白质

Cas9-一种蛋白质可以控制所有蛋白质

Cas9蛋白质的结构信息可能无法获得(事实上，目前只有少数的Cas9蛋白质的结构已经晶体化)。10月份《自然方法》上的一篇文章提出了一种稍微不同的生物工程方法:Scot Wolfe和他的同事描述了Cas9与可编程dna结合域的融合。该结构域可与sgRNAs协同设计，从而显著提高识别特异性。更重要的是，SpCas9融合蛋白对一系列PAMs (NAG、NGA、NGC和(SpCas的canonical) NGG)同样有效。可以想象，在未来，如果可以设计出一种核酸酶，其中的DNA亲和力由其识别序列定义，融合

【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法

。 实验步骤： 1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。 2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。 3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。 4.双酶切，插入到目标载体。 5.转化。 6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。 7.SDS-PAGE检测。 8.挑选高表达的多个克隆，测序。 怎么样？是不是很简单，不需要做太多的摸索

重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量

  重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量 按Qiagen公司的操作手册进行，具体步骤如下。 一、重组蛋白质的诱导表达 1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于3ml 选择性LB液体培养基中，37 o C，250 rpm/min振摇培养过夜。 2.次日将培养过夜的菌液500 μl再接种于10 ml（1: 20）选择性LB液体培养基中，37 o C，250 rpm/min振摇培养至光密度（OD600 =0.6）时，取1 ml样本作为诱导前标本