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文献和实验处理软件,BioWorks 3.1 ( Thermo Electron) 。 4. 注释 ( 1 ) 建议以一系列代表性的样品在加或不加 DTT/IAA 情况下验证还原和烷基化反应的效率(或无效性)。检查已鉴定肽段的数量,角蛋白的污染,和是否存在羧胺甲基化半胱氨酸(+ 57 Da) 。 ( 2 ) SpeedVac 会导致颗粒和干燥蛋白的溶解性减小,降低肽段的回收率。30 μl 的提取物在室温下需要过夜蒸发或在 4°C 蒸发 1~2 天。 ( 3 ) 液体接头应紧固耐用,足以运行数百个样品
烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS) SDS 10g 45%乙醇 100ml (十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8 Tris 12.114g
边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。 双抗1万u/ml 10ml 灭活小牛血清 110ml 混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。 (七)青、链霉素溶液 青霉素钠盐(40万u/瓶) 5瓶 链霉素(100万u/瓶) 2瓶 将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。 (八)二甲基亚砜诱导
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