NEB 代理商|P0710S 快速 PNGase F 5

【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答

液： 1X T4 DNA Ligase Buffer: [50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。 使用注意：ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 如在反应体系中补加1 mM的ATP，连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚

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裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。 d.  将裂解物13，000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid, 将所有裂解物上清转到一个新离心管。 e.  较精确估计裂解物(上清)体积,加入0.5体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。 f.  立刻接操作步骤项下3。 3. 将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中

酶切反应

化的内容，参见第252页至253页之甲基化相关内容。 五、 缓冲液 对于每一种酶NEB都提供相应的最佳缓冲液，可保证几乎100%的酶活性。使用时的缓冲液浓度应为1X。有的酶要求100μg/ml的BSA以实现最佳活性。在这种情况下，我们也相应提供100X的BSA（10mg/ml）。不需要BSA的酶如果加了BSA也不会受太大影响。关于缓冲液更详细的信息参见第234页。 六、 反应体积 内切酶活力单位的定义是：1小时内，50μl反应体积中，降解1μg的底物